医药学临床医学毕业论文 视网膜母细胞瘤病人体细胞中rb1基因突变的检测

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学临床医学论文题目：视网膜母细胞瘤病人体细胞中RB1基因突变的检测指导老师：XXX二〇一一年十二月十日作者：盛迅伦，吴伟民，庄文娟，容维宁，王娟，夏美华，章玲【摘要】目的检测视网膜母细胞瘤(RB)病人体细胞中RB1基因突变，探讨RB1基因突变的分子生物学机制。方法应用PCR-SSCP技术筛查RB病人白细胞基因组DNA，测序分析确定突变。结果在12例RB病人中，确定3例RB1基因生殖细胞性突变。他们分别是第10外显子中T至A杂合性突变，将苯丙氨酸编码

2、序列变为酪氨酸编码序列；第10外显子1bp碱基缺失(GAT→AT)，发生阅读框架改变；第22外显子中A至T杂合性突变，将精氨酸序列变为终止密码。结论这3例RB1基因生殖细胞性突变的方式为点突变和小缺失，这些突变改变了RB1基因的遗传信息，致使异常的RB1基因蛋白产生，导致视网膜母细胞瘤的发生。【关键词】视网膜母细胞瘤基因突变RB1DetectionofheterozygousmutationsofRB1geneinpatientswithretinoblastoma【Abstract】ObjectiveTostudyR

3、B1heterozygousmutationsinpatientswithretinoblastoma.MethodsGenomicDNAwasusedasatemplateforthePCRreactiontoamplifyallexonsofRB1gene.ThesePCRproductswerescreenedbysinglestrandconformationpolymorphism(SSCP)andsubjectedtodirectsequencing.ResultsThreegermcellmutation

4、sintheRB1genewereidentifiedincollectedgenomicDNAfromRBpatients:aTtoAtransition(TTC→TAC)atexon10，adeletionG(GAT→AT)atexon10，aAtoTtransition(AAG→ATG)atexon22.ConclusionMutationsinRB1geneareinvolvingafewbasepairsinthisstudy.Asaresultofsuchmutation，thenormalfunction

5、ofRBisusuallydisrupted，andretinoblastomaoccurred.【Keywords】retinoblastomagenemutationRB1视网膜母细胞瘤（简称RB），是婴幼儿最多见的高度恶性、致死率高的眼内恶性肿瘤。由视网膜母细胞瘤基因(RB1基因)的两条等位基因同时失活所致，分遗传型（30%～40%）和非遗传型（60%～70%）两种方式。遗传型视网膜母细胞瘤病人体细胞都携带RB1基因生殖细胞性突变，85%～90%可能会发生双眼或单眼多灶型视网膜母细胞瘤，下一代子女中约有50%的机

6、会遗传这一突变的基因，而其中的90%会患视网膜母细胞瘤［1，2］。因而，基于RB1基因生殖细胞性突变检测(遗传分型、产前与症状前基因诊断)，目前是视网膜母细胞瘤的预防与早期诊断的有效途径。为了进一步了解RB病人RB1基因的突变特点，为临床遗传检查提供更多可靠的信息，笔者应用分子生物学技术对RB病人体细胞中RB1基因进行突变位点的检测，并结合以前的工作［3］，探讨了RB1基因突变的分子生物学机制。1资料与方法1.1一般资料共收集散发RB病人12例，4例为双眼RB，其他8例为单眼RB，年龄1～5岁；同时收集了12例无亲属关

7、系的健康人作为正常对照组。1.2方法1.2.1DNA提取采外周静脉血10ml，应用DNA分离试剂盒（Promega公司产品）提取全血白细胞DNA。1.2.2聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）应用美国PE公司2400型PCR仪。参照Toguchida［4］报道的方法进行PCR引物设计。PCR反应体系：10×Buffer2μl（含MgCl210mmol/L），2×dNTP2μl（2mmol/L）引物2μl（10mmol/L），DNA模板1μl（1mmol/L），TaqplusIDNA聚合

8、酶0.5μl（510u/L），加双蒸水至100μl。95℃变性1min进入循环。95℃30s，退火30s，退火温度50℃～70℃（不同外显子，不同温度）。72℃延伸30s，共30个循环。最后72℃再延伸7min。PCR扩增产物的分析：取扩增产物5μl在1.5%琼脂糖凝胶电泳后进行EB染色，同时加Marker标记DNA相对分子质量。