血p53蛋白对肺癌诊断价值的研究

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1、血p53蛋白对肺癌诊断价值的研究作者：沈巨信秦娥周国忠韩东方贺群孙健【关键词】蛋白对肺癌肺癌发病率逐年增高，早期诊断对提高患者生存率至关重要。p53蛋白是肺癌相关基因p53基因编码的核酸蛋白，在癌变的早期阶段，即可在血液中出现［１］。本研究采用新技术－流式细胞术，分析FCM定量检测肺癌患者血细胞中p53蛋白水平，探讨p53蛋白在肺癌诊断中的应用价值。　　1临床资料一般资料肺癌组为XX年5月至XX年8月本院确诊患者，共30例，男21例，女9例，平均年龄(±)岁，所有入选的患者均经纤维支气管镜肺活检、经皮肺穿刺活检、手术等组

2、织病理学确诊，排除接受过放、化疗或肺癌手术，有严重心肺功能障碍不能耐受纤支镜检查者。其中鳞癌16例，腺癌8例，小细胞癌6例；按国际抗癌联盟分期标准进行临床TNM分期，I期6例、Ⅱ期10例、Ⅲ期9例、Ⅳ期5例。同期收集肺部良性疾病组30例为对照组，包括肺结核5例、支气管扩张6例、肺炎15例，慢性支管气炎4例，平均年龄(±)岁，经细菌学、影像学、病理学确诊。标本采集所有受检对象均抽肘静脉血5ml，放置-20℃冰箱内保存待检。实验步骤外周血细胞内p53蛋白检测采用双色标记法，取外周血2μlEDTAK2抗凝，CD45-PCY10

3、μl+100μl全血，避光反应15min。PSB离心沉淀物制成悬液，用试剂intrapreptm(Immunotech公司)单细胞固定和破膜。加破膜剂Ⅰ液150μl，振荡后放15min，加FPBS离心洗涤，取沉淀物，加破膜剂Ⅱ液150μl，轻轻混匀放置5min，加20μlp53流式细胞仪检测，轻轻摇匀1～2s，放置20min，加PSB1ml离心洗涤，上机，仪器方案“XXp53”，计数1万个细胞中p53表达百分率作为观察数据。主要试剂及仪器p53蛋白抗体试剂盒购自CellSignalTechnology公司。流式细胞仪由美

4、国公司提供，型号为CoulterEPICS－XL。统计学处理计量资料用(x±s）表示，均数间比较采用t检验，以Excel000建立数据库，应用受试者工作特征曲线分析法综合评价诊断实验的实用价值。所有统计计算及绘图采用SPSS系统软件完成。　　2结果.1两组患者血p53蛋白检测水平比较肺癌组(±)、对照组(±)，2组比较，差异有显著性(P.2肺癌患者血p53蛋白水平与病理类型的关系p53水平小细胞肺癌6例，为(±)、非小细胞肺癌24例，为(±)，2组比较，差异有显著性P＜。.3p53蛋白对肺癌诊断的敏感性和特异性分析以肺部

5、良性疾病为对照组，以1－特异性作横坐标，敏感性作纵坐标，作ROC曲线，选择诊断分界点及敏感性和特异性。用p53试剂进行检测，取诊断点为，其诊断敏感性为70％，特异性为％，准确率％，Youden指数为。进一步计算ROC曲线下面积(Az)，显示单个试剂p53的曲线下面积为。表1单个试剂p53的ROC曲线下面积、标准误、P值和95％可信区间　　3讨论p53基因定位于17号染色体短臂，全长20kb，共有11个外显子和10个内含子，其外显子5～8是突变热点区域，主要生物学功能为细胞周期阻滞、DNA修复、诱导细胞调亡等［２，３］。抑

6、癌基因p53突变是人类癌症中最频发的基因事件之一，与肺癌之间存在相关关系，有报道在SCLC患者中有90%～100%发生p53基因突变，在NSCLC的各种类型如腺癌、鳞癌等患者中p53基因突变率也达50%～60%，对肺癌的早期诊断有重要意义［４］。董光同等［5］报道小细胞肺癌p53基因突变为98%，鳞癌为75%，腺癌40%，且与分期关系为Ⅰ期26%，Ⅱ期58%，Ⅲ期71．4%［５］。p53基因突变直接导致突变型p53蛋白高表达，p53蛋白作为一个细胞周期调控因子，在细胞增殖与凋亡的平衡上起着重要的作用，它的异常早于肿瘤的发

7、生［６］。周欣等［７］报道用免疫组化方法检测肺癌患者痰p53蛋白表达,结果发现p53蛋白是肺癌发生的早期事件,在组织发生恶变后无显著关系。故检测血p53蛋白的表达可以早期检测p53基因的异常。正常情况下，p53蛋白分泌较少，很不稳定，半衰期短，普通检测方法很难检测到。而突变型p53蛋白结构稳定，半衰期延长，可在胞内大量聚集，当机体免疫力下降时，一些肿瘤细胞可逃避免疫攻击向周边浸润，部分进入血液循环，并向远处转移［8］。作者采用FCM检测患者血细胞中p53蛋白，实验结果显示两组患者p53检测水平比较差异有统计学意义，肺癌组

8、水平显著高于对照组，提示该方法可用于辅助诊断肺癌。血p53蛋白水平在小细胞肺癌组与非小细胞肺癌组比较差异有统计学意义，小细胞肺癌组p53水平明显高于非小细胞肺癌组，推测是否与小细胞肺癌恶性程度高，增殖活跃，早期发生血循转移，在外周血中出现癌细胞有关，有待进一步观察。　　ROC分析是国际公认的评价诊断方法效能的客观标准