重组腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对SD大鼠视网膜神经细胞及血管内皮细胞的影响.doc

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1、重组腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对SD大鼠视网膜神经细胞及血管内皮细胞的影响作者：宋哲　黎晓新　于文贞　董建强　闫征【摘要】　　目的：研究腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUC)及视网膜神经细胞影响作用。方法：亚克隆构建pSNAV-Kringle5-gfp载体，腺伴随病毒包装形成rAAV-Kringle5-gfp；HUC培养及SD大鼠视网膜神经细胞培养；按设计分为试验组、阴性对照组和空白对照组；聚合酶链反应(PCR),MTT法对各组进行细胞活力测定；荧光显微镜照相。

2、结果：腺伴随病毒载体介导Kringle5基因产生Kringle5物质对HUC有抑制作用，实验组与对照组比较P<0.01，实验组与空白对照组比较P>0.05；腺伴随病毒载体介导Kringle5基因产生Kringle5物质对SD大鼠视网膜神经细胞实验组和空白对照组没有影响，实验组与对照组及实验组与空白对照组比较P>0.05。结论：腺伴随病毒载体介导Kringle5基因能够对新生血管有抑制作用而对视网膜神经细胞无不良影响作用。【关键词】腺伴随病毒载体　血管抑制素Kringle5　血管内皮细胞　SD大鼠视网膜神经细胞　　Adeno-associatedviru

3、stype-2expressionofKringle5effectonHUCandRetinalcellofSDratAbstractAIM:Toinvestigatetheeffectofrecombinantadeno-associatedvirusvectorexpressinghumanKringle5ontheHUC(HumanUmbilicalVeinEndothelialCells)andtheretinanervecellofSDrats.METHODS:Thehumankringle5cDNAwaspluggedintoexpressionvector

4、ofpSNAVtoconstructtheplasmidpSNAV-Kringle5-gfp.HUCandtheretinanervecellofSDratswerecultured.Allthesamplesweredevidedintothreegroups:experimentalgroup,negativecontrolgroupandblankcontrolgroup.Polymerasechainreaction(PCR),MTTassayandfluorescencemicroscopywereapplied.RESULTS:rAAV-Kringle5pr

5、oducedkringle5,whichinhibitstheHUC(P<0.01betweenexperimentalgroupandcontrols;P>0.05betweenexperimentalgroupandblankcontrol)buthasnoeffectontheretinalnervecellofrats(P<0.01betweenexperimentalgroupandcontrols;P<0.05betweenexperimentalgroupandblankcontrol).·CONCLUSION:Themethodo

6、fproducingkringle5byrecombinantadeno-associatedviruscanbeusedtoinhibitretinaangiogenesiswithnoeffectonretinal4nervecells.·KEYWORDS:adeno-associatedvirusvector;Kringle5;HUC;retinalnervecells　　0引言纤维溶酶原Kringle5片断能够抑制肿瘤的生长，对新生血管形成具有极强抑制作用，是目前发现抑制新生血管作用最强的抑制剂[1]。在眼科方面，国内外文献曾报道用Kringle5制剂治疗新生血

7、管如脉络膜新生血管，视网膜新生血管，角膜新生血管等报道[2-4]。Kringle5是纤维溶酶原片段,由80个氨基酸组成[1,5]，它的获得主要是通过提取纤维溶酶原裂解获得,但是获取量有限且工艺复杂。理想的方案是利用基因重组技术将其在生物体内长期表达达到治疗新生血管目的。2型腺伴随病毒具有对人体不致病，能感染分裂和非分裂期细胞等优点，在此基础上改建得到的重组腺伴随病毒载体是较理想的基因转移载体[6]。在本实验中，我们利用腺伴随病毒载体介导Kringle5基因,观察其对视网膜神经细胞和血管内皮细胞是否有作用，为下一步动物实验提供实验依据。1材