腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子对大鼠扩张后皮瓣存活的影响

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1、郑州大学2006硕士学位论文腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子对大鼠扩张后皮瓣存活的影响腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子对大鼠扩张后皮瓣存活的影响研究生张歌推荐导师刘林蟠王喜梅郑州大学第一附属医院整形外科河南郑州450052引言皮肤软组织扩张术自1976年Radovan将可控性软组织扩张器应用于临床以来得到广泛的应用和发展。皮肤软组织扩张术是利用扩张器通过手术植入皮下或肌肉下层后使其表面皮肤逐渐伸展，提供“额外”的皮肤和皮下组织，用于修复大块组织的缺损和器官再造“，劲，是整形外科发展史上里程碑性的成果之一o㈤。虽然使用扩张器后可提

2、供额外的皮瓣，但在临床应用中常因修复创面过大、皮瓣的长宽比失调而仍有皮瓣远段坏死的现象⋯，”，这就需要进一步研究来改进，由此产生了外科延迟4’、药物延迟。’、生长因子治疗和基因治疗等增加皮瓣存活的方法“m。药物延迟模仿了外科延迟，在一定程度上增加了皮肤血流和随后的皮瓣成活。药物延迟包括以下几个方面：(1)使用抗交感神经药物、血管舒张药物和钙通道阻滞剂，以减缓血管收缩。(2)改善微循环。(3)阻滞花生四烯酸代谢产物的合成。(4)保护和治疗缺血损伤。其中大多数方法仅有改善组织损伤后缺血的边缘效应，没有哪一个方法能令人满意地解决问题m

3、3。近年来，随着免疫学、分子生物学及基因工程技术的飞跃发展，除了常规用解痉和扩血管药物改善皮瓣血运之外，生物疗法也取得了长足的进步。该方法大体可分为三部分：体细胞治疗、细胞因子治疗、基因治疗，其中最具有潜力的应属基因治疗。在正常情况下，血管内皮细胞的增殖与分化受促血管生长因子与抑血管生长因子等综合因素的综合调节，处于一种动态平衡中。促进血管生成的因子很多“2。钔，主要包括：成纤维细胞生长因子、转化生长因子Ⅲ’、肿瘤坏死因子一a、血管内皮细胞生长因子(、kcularendothelialgr0州hf她tor，ⅥⅪF)、血小板衍化生

4、长郑州太学2006硕士学位论文腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子对丈鼠扩张后皮瓣存活的影响因子、肝细胞生长因子等。其中ⅦGF是强有力的血管内皮细胞特异性生长因子H。，是血管生成的重要诱导因子，又称血管通透因子或促血管因子，是一种同型二聚体糖蛋白。其主要生物学功能是促进血管生成和血管发生，增加血管通透性，维持血管正常状态和完整性嚏7’181。国内也有学者报道生长因子促进预构皮瓣成活的试验“们。senger于1983年发现了vEGF，ⅦGF家族包括六部分‘姗，血管生成作用主要与VEGEA有关汜”。许多研究证实，局部使用外源性vEGF，

5、可以刺激血管生成及增加皮瓣和肌皮瓣存活。ⅦGF已在周围血管疾病、肿瘤、糖尿病、创伤修复及组织重建领域得到广泛研究和初步应用。应用ⅦGF的方式主要有蛋白注入和基因转入，由于VEGF半衰期短(<6min)，多数人认为局部应用ⅦGF效果优于全身应用，且用量大，较为繁琐幢剐。使用病毒载体介导的基因治疗方法提供了高的转染效率，能够产生更为有效和持续的作用。Ⅵ沁F应用于皮瓣移植可将其比例扩展至l：3—3．5f2卦。最新研究表明，应用了扩张器的组织中有VEGF表达㈨1，并在缺血和血管内皮细胞受损时表达增强幢5，2剐。关于扩张后皮瓣局部注射由病

6、毒介导的vEGF对移植后皮瓣存活影响的研究目前罕见报道。本实验研究的目的在于探讨超长宽比例随意型扩张皮瓣局部注射Ad．vEGF对皮瓣存活的影响，并对其作用机制进行初步探讨，为应用基因治疗超长皮瓣移植存活提供实验支持。但是本实验未进行组织活性的测定，在Ad一ⅦGF应用的有效剂量、安全剂量等方面还有待于进一步的研究。2郑州大学2006硕士学位论文腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子对大鼠扩张后皮瓣存活的影响材料与方法1实验动物来源、饲养环境和手术条件健康纯种10周龄sD大鼠(spraqueDawleyRat)20只，雌雄不限，体重300

7、～490克，由第四军医大学动物实验中心提供，并在该动物实验中心清洁级实验室饲养。手术室及设备由该中心提供，为标准无菌动物手术室。2主要手术器械一次性使用医用备皮刀一次性使用无菌注射器非吸收性外科缝线不锈钢医用缝合针一次性使用无菌手术包图像分析仪显微镜扫描仪Hw一600型高频电离子手术治疗仪30ml硅橡胶软组织扩张器3主要试剂、药品分析用硫化钠聚维酮碘溶液甲苯胺蓝注射用戊巴比妥钠注射用头孢拉定腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子(Ad．VEGF)一抗：增殖细胞核抗原PCNA(PCI0)ZM．0213北京美迪亚斯塑料制品厂香港BD亚洲有

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