rhepo对糖尿病大鼠随意皮瓣存活影响的实验研究

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1、温州医学院硕士学位毕业论文答辩委员会成员：肖健副数援温州医学院硕士学位毕业论文目录中文摘要⋯⋯·⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯““”⋯⋯⋯．．”⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯·⋯····⋯·600······⋯····⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7正文1。材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯173．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯·⋯⋯···⋯⋯·204．结论⋯⋯⋯⋯····⋯········⋯⋯⋯

2、·····⋯⋯·⋯·⋯····⋯⋯··⋯⋯··235．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32致谢⋯···⋯⋯·⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯····⋯···34综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯····⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44独创性声明⋯⋯··⋯····⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一·50温州医学院硕士学位毕

3、业论文rhEPO对糖尿病大鼠随意皮瓣存活影响的实验研究中文摘要目的研究重组人促红细胞生成素(rhEP0)对糖尿病大鼠超长随意皮瓣存活的影响，探讨其作用机制，为临床上治疗糖尿病病人皮瓣坏死提供一种新的思路和方法。方法l、构造糖尿病模型大鼠：选取健康50只SD大鼠，随机选取12只为健康对照组(A组)，其余38只腹腔注射链脲佐菌素(STZ，55mg／kg)建立糖尿病大鼠模型，饲养6周，最终的24只SD大鼠(空腹血糖>200mg／dL)为造模成功的糖尿病大鼠。2、构建背部超长随意皮瓣模型：将12只健康对照组大鼠(A组)，24只糖尿病大鼠平均

4、分成糖尿病EP0干预组(B组)、糖尿病对照组(c组)，再次构建大鼠背部超长任意瓣模型(3cm×10cm)，结扎皮瓣中包括皮瓣基底部的所有知名血管，彻底止血后，在皮瓣基底床垫入同样大小无菌硅胶片，用无菌缝合线原位缝合，术后给予常规的抗炎、抗休克治疗，立刻给予腹腔注射适量的生理盐水及切口表面涂少量的红霉素软膏，成模后B组术后腹腔注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)(5000U／kg)，A组、C组腹腔注射等量生理盐水。3、对皮瓣的情况观察：每日观察记录皮瓣的状况，包括皮瓣的色泽，组织质地、弹性。4、皮瓣成活率的统计：术后第10天，使用N

5、ikonP310数码相机拍照带有刻度标记的照片，输入计算机，用Image-ProPlusv6．0软件统计计算三组皮瓣的成活率(皮瓣成活率7--．皮瓣成活表面积／皮瓣总表面积×100％)。5、皮瓣的HE染色组织学观察：在三组sD大鼠皮瓣的坏死与存活的交界区域切取组织标本，浸泡于4％多聚甲醛溶液中，然后用石蜡包埋，制作成厚约3-4微米的切片，用于}lE染色组织学观察和免疫组化检测。在低高倍镜下观察皿染色后切片，观察组织的水肿、炎症细胞的侵润、坏死情况等。6、相关指标的免疫组化检测：采用二步法进行免疫组化检测VEGF、CD31表达，按VE

6、GF、CD31免温州医学院硕士学位毕业论文疫组化试剂盒的使用说明操作。每张片子选择染色均匀的的区域，在400倍的光镜下观察，随机选择5个视野拍摄保存，拍摄条件设置参数均一致。将保存的图片导入Image-ProPlusv6．0软件，检测VEGF阳性表达的累积吸光度值，作为评价VEGF表达的指标。低倍镜下(100×)检视每张切片表达棕褐色阳性颗粒CD3l微血管染色分布，确定最高微血管染色区域，选择5个最高微血管染色区域于高倍镜下(400×)分别进行微血管记数，计算平均数。7、ELISA检测每组大鼠血清中SDF．1仪及MMP．9含量：每只

7、大鼠处死后立刻采取摘眼球法，收集5ml的血液，采好的血4℃保存30min，然后低温(4℃)离心(3000r／min；15min)，约可获得1—1．5ml的血清标本，分别按照MMP-9、SDF．10tELISA试剂盒说明，采用双抗体夹心法测定血清中的MMP一9、SDF．10t的含量，分别以ng／ml、pg／ml蛋白为其单位。结果1、皮瓣情况观察：术后第l天，三组皮瓣远端均可见不同程度的肿胀、远端灰紫色，术后第5天，三组皮瓣尾端出现点状的结痂，坏死迹象开始出现，术后第10天，三组皮瓣的尾端出现明显的黑色痂壳，坏死区与存活区已可分辨出明显

8、的界限。2、皮瓣存活率：皮瓣面积C组(33．34±2．01)％明显低于A(50．17±2．29)％组与B(48．3±2．43)％组(P<0．01)，A、B组间无差异(P>0．05)。3、皮瓣的组织学观察：糖尿病对照皮瓣组(c组)较健康