白术黄芪汤通过抑制NLRP3炎症小体治疗DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎

《白术黄芪汤通过抑制NLRP3炎症小体治疗DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、国内图书分类号：R285.5密级：公开国际图书分类号：西南交通大学研究生学位论文白术黄芪汤通过抑制NLRP3炎症小体治疗DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎年级二〇一五级姓名沈佳雯申请学位级别医学硕士专业药学指导老师耿耘教授吕爱平教授二零一八年五月ClassifiedIndex:R285.5U.D.C:SouthwestJiaotongUniversityMasterDegreeThesisBAIZHUHUANGQITANGALLEVIATESULCERATIVECOLITISINDSS-INDUCEDMICEV

2、IAINHIBITIONOFNLRP3INFLAMMASOMEGrade:2015Candidate:JiawenShenAcademicDegreeAppliedfor:MasterofMedicineSpeciality:PharmacySupervisor:Prof.YunGengProf.AipingLuMay.2018√西南交通大学硕士研究生论文第I页摘要目的：本研究旨在探究白术黄芪汤对葡聚糖硫酸钠（dextransulphatesodium，DSS）诱导的溃疡性结肠炎（ulcerativeco

3、litis，UC）小鼠的治疗作用及其对NOD样受体蛋白3（NOD-likereceptorprotein3，NLRP3）炎症小体的调节作用，为白术黄芪汤临床用于UC的治疗提供实验依据。方法：1.通过动物实验，确定白术黄芪汤对UC的治疗效果。选用6-8周龄雄性C57BL/6小鼠，随机分为6组：空白组（Control）、模型组（Model）、阳性药美沙拉嗪组（5-AminoSalicylicAcid，5-ASA，0.52g/kg/d）、白术黄芪汤低剂量组（BZHQT，3.9g/kg/d）、白术黄芪汤中剂量组（

4、BZHQT，7.8g/kg/d）、白术黄芪汤高剂量组（BZHQT，15.6g/kg/d），每组8只。空白组饮用蒸馏水7天，其他组自由饮用2.5%DSS溶液7天。给药与造模同一天开始，空白组和模型组给药相同体积的蒸馏水。实验期间测量并记录小鼠体重，便溏，便血及疾病活动指数（diseaseactivityindex，DAI）。治疗结束后，观察结肠缩短程度，重量，用苏木素-伊红染色法（hematoxylinandeosin，HE）观察并评价结肠病理学改变，检测结肠组织中髓过氧化物酶活性（myeloperoxid

5、aseactivity，MPO）。2.通过体外实验探究白术黄芪汤对NLRP3炎症小体的调节作用。利用佛波酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）诱导U937细胞48h。用细胞计数试剂盒（cellcountingkit-8，CCK-8）检测不同浓度白术黄芪汤（0μg/mL，3.125μg/mL，6.25μg/mL，12.5μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL）对细胞活力的作用。将细胞浓度调整5为5×10个/mL并接种于6孔板，每孔2mL。设置空白组

6、（Control）、模型组（LPS，1μg/ml）、白术黄芪汤组（BZHQT，25μg/mL）、阳性对照组（INF39，10μM）。PMA诱导48h后，除空白组外，其他组加入脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）（1μg/mL），空白组加入同等体积的磷酸盐缓冲液（phosphatebuffersaline，PBS）。培养2h后，白术黄芪汤组和阳性对照组分别加入对应浓度的药物，空白组和模型组加入等量的新鲜培养基。48h后，收集各组细胞上清及细胞。利用酶联免疫吸附测定（enzymelinke

7、dimmunosorbentassay，ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素（interleukin，IL）-1β的含量。利用实时荧光定量（RT-PCR）和免疫印迹法（Westernblot）测定细胞中NLRP3、西南交通大学硕士研究生论文第II页凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associatedspeck-likeproteincontainingaCARD，ASC）、半胱天冬酶-1（cysteinylaspartate-specificprotease-1，Caspase-1）及IL-1β

8、的mRNA水平和蛋白水平的改变情况。3.通过体内实验再次验证白术黄芪汤对NLRP3炎症小体的调节作用。利用2.5%DSS诱导小鼠UC模型。实验设空白组（Control），模型组（Model），阳性药组（5-ASA，0.52g/kg/d）及白术黄芪汤组（BZHQT，7.8g/kg/d）。造模与给药同时进行，连续7天。于第8天处死动物，收集小鼠血清及结肠组织。采用ELISA法检测小鼠血清中IL-1β含量；采用RT-PCR及West