纤维粘连蛋白EDA+片段在退变椎间盘中的表达及其意义.doc

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1、纤维粘连蛋白EDA+片段在退变椎间盘中的表达及其意义作者：胡宝山，丁悦，李春海，刘尚礼，吕浩然，叶伟【关键词】椎间盘退变摘要：［目的］检测退变椎间盘内EDA+Fn的表达，探讨损伤在椎间盘退变中的作用。［方法］收集人腰椎间盘退变临床手术标本，经病理证实均发生退变，采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）技术扩增目标条带。［结果］正常椎间盘内没有EDA+Fn的表达，而退变椎间盘内均有EDA+Fn的表达；中重度退变者EDA+Fn的表达较轻度退变者为多（轻中度组间P=0016＜005；轻重度组间P=0007＜005），中重度之间则没有明显差别（P≥0501）。［结论］EDA+Fn在退变

2、椎间盘内有较高表达，直接证明损伤是椎间盘退变的重要的致病因素之一。关键词：椎间盘退变；纤维粘连蛋白；可变剪接Abstract：［Objective］Tostudytherelationshipbetweentraumaandthelumbardiscdegenerationandtodetecttheexpressionofthefibronectinsplicingvariantsinthedegeneratedlumbarintervertebraldisc,andstudytheexpressionofEDA［Method］Thehumanlumbarinterver

3、tebraldisctissueswerecollectedtoextracttotalRNAwhichwasthenamplifiedbyRTPCRtechnique［Result］EDA+Fnofnormallumbarintervertebraldiscwerenotexpressed,whereasEDA+FnofdegeneratedlumbarintervertebraldiscwereexpressedabundantlyThedefferencebetweendifferentgroupshasstatisticalsignificance［Conclusi

4、on］EDA+Fnhasverystronglyexpressioninthelumbardegeneratedintervertebraldisc,andthetraumaisoneofprerequisitefactorsinthediscdegeneratedprocessprobablelyKeywords：Intervertebraldiscdegeneration;Fibronectin;Alternativesplicing下腰痛是脊柱外科的常见病，其中椎间盘退变为其主要原因之一，椎间盘退变的病因包括年龄、创伤、遗传等因素。但究竟何种机理启动退变，目前尚不清楚

5、。椎间盘退变机理的研究是目前国内外脊柱外科研究的热点。纤维粘连蛋白（fibronectin，Fn）是一种大的纤维状糖蛋白，在机体内广泛存在，已证实其可变性剪切异形体EDA+Fn与损伤关系密切，常常作为损伤鉴定的标志。同时发现EDA+Fn能够体外诱导某些与椎间盘退变关系密切的细胞因子、相关酶类的表达。本研究检测正常和退变椎间盘组织中EDA+Fn的表达，探索椎间盘退变的机理。1材料与方法411主要材料与试剂退变椎间盘标本取自椎间盘突出症患者手术摘除的标本，共10例，均经病理证实有腰椎间盘退行性变。对照组3例椎间盘组织标本，取自新鲜尸体，经病理检查未见退变表现。取出组织立即液氮冷

6、冻后，放入零下80℃保存备用。RNA提取试剂盒（美国MRC公司）；RT试剂（Promega公司）；PCR试剂盒（TaKaRa宝生物工程公司）：引物由上海生工生物工程公司合成，分别为：EDA，5′GACTATTGAAGGCTTGCAGCC3′（sense），5′CTTGTGGGTGTGACCTGAGTG3′（antisense）（扩增长度包含EDA片段495bp，不包含EDA片段356bp）;GAPDH，5′TCTTCTTITGCGTCGCCAGC3′（sense），5′GAGGCAGGGATGATGTTCTG3′（antisense）（扩增长度453bp）。12MRI确定椎

7、间盘退变与否的标准取矢状位MRIT2加权图像，重复时间2500ms，回波时间90ms。图像由有经验的专业医师行双盲评定。结果按Schneidermans分级，标准为：1级（正常）：正常信号强度；2级（轻度）：椎间盘信号轻度减低；3级（中度）：信号重度减轻；4级（重度）：椎间盘信号完全消失。对照组均为1级，实验组2级4个标本，3级3个标本，4级3个标本。13RTPCR反应液氮研磨各组组织标本后，抽提总RNA，进行RTPCR扩增，每管加入待测基因引物进行扩增，EDA扩增PCR反应体系采用94℃5min、94℃30s、5