人参蛋白、多肽的提取分离及其性质的研究

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1、长春中医药大学２００９届硕士学位论文　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　英文缩略语　英文缩略语缩写字及符号中文HPGFCSephadexG-75SDS-PAGETrisTEMEDß-MercaptoethanolCoomassieBlueR-250O.DPBSrpmDMSOMTTSDS高效凝胶过滤色谱葡聚糖凝胶G-75十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳三羟甲基氨基甲烷N，N，N’，N’-四甲基乙二胺ß-巯基乙醇考马斯亮兰R-250光密度磷酸盐缓冲液转/分钟二甲基亚砜3－（4，5－二甲基噻唑－2

2、－2，5－二苯基四氮唑溴盐十二烷基硫酸钠4　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　长春中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名年月日关于学位论文成果归属权的声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下自选课题或导师承担的国家立项资助

3、的计划课题的一部分，系本人在导师指导和资助下独立进行研究工作所取得的成果，归属权为长春中医药大学和本人导师所有。特此声明，本声明的一切法律责任由本人承担。论文作者签名指导教师签名年月日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解长春中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权长春中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名指导教师签名年月日长春中

4、医药大学２００９届硕士学位论文　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中文摘要　中文摘要目的：选择研究较少但活性多样的大分子－人参蛋白及多肽，通过现代分离纯化技术、活性检测技术及分析鉴定技术进行生物特性研究。通过对园参、野山参及西洋参中蛋白成分进行比较研究，为人参药材的鉴别和质量评价提供依据。方法：采用不同缓冲溶液、不同料液比、不同浸提时间提取人参总蛋白，利用Bradford法测定蛋白含量，以蛋白提取率为评价指标进行正交实验，优选出最佳提取工艺。利用膜分离技术及柱层析技术对总蛋白进行分离纯化，结合

5、细胞活性实验进行活性筛选。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）及凝胶电泳图像分析软件，对园参、野山参及西洋参中蛋白成分进行比较研究，比较三者在蛋白分布及含量上的差异。结果：正交实验结果表明缓冲液的pH值、料液比、浸提时间对人参总蛋白的提取率均有影响。当选用pH7的缓冲液浸提，料液比为1:15，浸提时间为18h时,蛋白提取率最高，经过中空纤维膜过滤系统处理，收率可达3%，纯度可达80%以上。从人参总蛋白中分离纯化出了分子量为5027Da的人参多肽，活性实验表明，对Hep-2细胞具有抑制作用，对3T3细胞具有增殖作用，且活性呈现一定量

6、效关系。电泳分析结果表明，园参、野山参、西洋参三者的蛋白的分子量主要分布在60.20-5.03kDa范围内，但在含量上却存在很大的不同。园参中各种蛋白的含量均比较高；野山参中的蛋白含量较低，比较高的蛋白只有两种，分子量分别为60.20kDa，16.50kDa，其它几种蛋白的含量较园参均比较低；西洋参中蛋白分子量为60.20kDa，25.20kDa，18.20kDa三种蛋白的含量较高，其它几种蛋白的含量较园参也均比较低。结论：人参总蛋白的最佳提取工艺为：中性缓冲溶液浸提，料液比为1:15，浸提时间为18h。利用膜分离技术可以获得高纯度、高收率的人参

7、总蛋白，它解决了传统工艺中操作繁琐，周期长，成本高等问题，更加适合于工业化生产。人参多肽对3T3细胞增殖具有促进作用，对Hep-2增殖具有抑制作用，表明其具有促进成纤维细胞生长及抑制上皮细胞癌生长作用。园参、野山参和西洋参三者蛋白的差异，可以为三者的鉴定及质量评价提供新的依据。关键词：人参蛋白多肽提取工艺性质研究1长春中医药大学２００９届硕士学位论文　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　英文摘要　ABSTRACTObjective:Ginsengproteinsandpolypeptid

8、e,whichhaveavarietyofbiologicalactivitiesbutlessreasearches,werestud