鲤鱼鱼皮胶原蛋白的提取及其性质研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com氨基酸和生物资源2008，30(1)：18～21AminoAcids＆BloticResources鲤鱼鱼皮胶原蛋白的提取及其性质研究张俊杰，段蕊，刘佳梅，陈烨，黄静洁，今野久仁彦(1．江苏海洋生物重点建设实验室淮海工学院海洋学院，连云港，222005；2．北海道大学水产学部，日本函馆)摘要：首先对鲤鱼鱼皮的成分进行了研究，通过凯氏定氮、索式抽提、高温灰化、直接干燥法测定了鱼皮的蛋白质、脂肪、灰分、水分含量。通过粘度测定法得到鱼皮胶原蛋白的变性温度为28％左右；紫外可见光谱扫描的结果证明鱼皮胶原蛋白在228nm有一最

2、大吸收峰；SDS—PAGE电泳初步确定鱼皮胶原蛋白是I型胶原蛋白；酶解实验进一步证实了鱼皮同鱼鳞、鱼骨的胶原蛋白在结构上具有很大的相似性。关键词：鱼皮；胶原蛋白；提取；性质中图分类号：TS254．1文献标识码：A文章编号：1006—8376(2008)01—0018—04随着水产品加工业的快速发展，产生了大量的灰分测定J：采用高温灼烧法。鱼皮、鱼鳞、鱼骨等废弃物，如不加以充分利用，不仅水分测定：采用105~C直接干燥法。会污染环境，也浪费了资源。由于近年来疯牛病、口1．2．2鱼皮中胶原蛋白的提取蹄疫等传染性疾病的发生和流行，使人们对来源于所有操作在4~C下进行。牲

3、畜的胶原蛋白的安全性发生了怀疑，另外，来源于原料处理一洗涤一去杂蛋白一去脂肪一0．5牲畜的胶原蛋白在信仰伊斯兰教、回教等地区的应mol·L乙酸提取一过滤一盐析一透析一冷冻干燥用受到限制。因此，研究和开发鱼皮、鱼鳞、鱼骨等一鱼皮胶原蛋白水产加工废弃物中的胶原蛋白逐渐受到人们的重1．2．3紫外可见光谱扫描视。准确称取0．005g胶原蛋白加入5mL，0．5mol胶原蛋白是由三条多肽链组成呈三股螺旋结构·L乙酸，充分溶胀，振荡使之全部溶解(4~C下进蛋白质，作为一种天然的高分子化合物，其特有的结行)，样液经冷冻离心，取上清液在200nm一460nm构和化学组成使其在生物医

4、学材料、药物输送载体、范围内进行紫外可见光谱扫描。组织工程、化妆品和食品等领域得到了广泛应1．2．4粘度测定用J。鱼皮胶原蛋白可以作为一种安全的食品添取皮ASC0．075g溶于10mL乙酸(0．1mol·加剂。此外，研究表明，胶原蛋白还具有抗衰老、组L)中，用旋转粘度计在不同温度下测定粘度值。织修复、伤口促愈等生理功能，作为医用生物材料，1．2．5SDS—PAGE电泳具有良好的应用前景。0．1mL胶原蛋白溶液与0．1mLSDS样品处理液混合后，沸水浴加热3min点样，开始电泳。电流1材料与方法开始为10mA，至浓缩胶，分离胶界限处调整电流为1．1材料：15mA，电

5、泳结束，固定液固定30min，染色1h，脱色直到无底色，做成干胶，拍照。鲜活鲤鱼宰杀后取鱼皮装于密实袋中，置于一25~C冰箱保存。1．2．6酶解实验1．2实验方法准确称取胶原蛋白0．005g，加入1mL的Tris1．2．1鱼皮成分的测定—maleate(pH7．0)，沸水浴加热3—5min。按1／500蛋白质测定]：采用凯氏定氮法。或1／800加入质量浓度为0．15g·L蛋白酶K，分脂肪测定J：采用索式抽提法。别在0℃，15℃酶解，达到相应时间时立即取0．1mL样品加入0．1mL的SDS样品处理液，沸水浴加热3min后置于一20~C冰箱保存待用，点样时自然解冻，收

6、稿日期：2007—11—26作者简介：张俊杰，男(1970一)，博士，副教授，从事水产品加工与综进行SDS—PAGE电泳。考查不同酶用量和酶解温合利用方面的研究。基金来源：江苏省海洋生物重点建设实验室基金资助项目，项目编号度对胶原蛋白的分解效果。20o6HS0】6维普资讯http://www.cqvip.com张俊杰等：鲤鱼鱼皮胶原蛋自的提取及其性质研究·l9·2结果与讨论2．1成分分析2．1．1蛋白质测定：经凯氏定氮测得鲤鱼皮中粗蛋白含量占鱼皮鲜重的20．14％。2．1．2脂肪测定：采用索式抽提法测定得鱼皮粗脂肪质量分数为21．55％。2．1．3灰分测定：通过高

7、温灰化法测得鲤鱼皮中灰分质量分数为0．67％2．1．4水分测定：经105℃，烘干至恒重后测得水分质量分数为52．68％。2．2鱼皮中胶原蛋白的提取图1鱼皮胶原蛋白紫外可见光谱扫描由表1可以看出，鱼皮在4℃下经过一次提取(48h)，得率是8．9％，随后再进行二次提取，得率18．4℃，鲭鱼鱼皮变性温度为26．1℃，秋刀鱼变性增加了0．6％，说明鱼皮经过48h提取后，大部分胶温度为23．0℃，鲑鱼为19．4℃，猪皮胶原蛋白的变原蛋白已经提取出来，再延长提取时间，对提取率的性温度为37℃¨，一般来讲，来自海洋鱼类胶原蛋贡献不大。白的变性温度比来自陆地动物胶原蛋白的变性温度

8、低，这与生