KIR和HLA-C基因与复发性流产关联性研究

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1、学校代码10459学号或申请号201522524353密级公开专业硕士学位论文KIR和HLA-C基因与复发性流产关联性研究作者姓名：苏宁导师姓名：廖世秀教授专业学位名称：妇产科学培养院系：郑州大学人民医院完成时间：2018年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterStudyonKIRandHLA-CgenesinpatientswithunexplainedrecurrentspontaneousabortionByNin

2、gSuSupervisor:Prof.ShixiuLiaoDepartmentofGynecologyandObstetricsPeople’sHospitalofZhengzhouUniversityMay,2018KIR和HLA-C基因与复发性流产关联性研究研究生：苏宁导师：廖世秀教授专业：妇产科学郑州大学人民医院河南郑州450003摘要背景与目的复发性流产（recurrentspontaneousabortion,RSA）是妇产科常见的异常妊娠疾病，对患者及家庭造成严重的健康影响及情感创伤。育

3、龄夫妇发生连续两次及以上自然流产的概率约2-5%，且在年龄≥35岁女性中发生比例更高。RSA的病因复杂多样,主要包括遗传因素、解剖异常、精子质量异常、内分泌紊乱、感染、免疫功能异常、血栓形成倾向、全身性的疾病以及环境因素。但据估计约一半的RSA夫妇未发现明确的致病因素。正常孕期胎儿滋养细胞侵入母体子宫血管，母血释放入绒毛间隙为胎儿提供直接营养，且直接暴露的滋养细胞不引发母体同种异体免疫排斥反应。子宫免疫应答反应允许胎盘得到母体营养供给同时抑制其过度植入，破坏滋养细胞与子宫组织的这种平衡状态将导致一系

4、列的临床问题。随着对不明原因复发性流产的深入研究，学者发现母胎接触面免疫异常可能导致流产的发生，其中广泛存在于子宫蜕膜的自然杀伤细胞（naturalkillercell,NK）免疫球蛋白样受体(killercellimmunoglobulin-likereceptor,KIR)基因及其配体-人类白细胞抗原（Humanleukocyteantigen,HLA）基因因其独特的组合及功能的多样性被认为在妊娠免疫排斥反应中发挥重要作用。最近几十年，越来越多的文献报道KIR基因家族和HLA-C配体与RSA发生

5、相关，但意见迥异。本研究旨在对中国河I南汉族不明原因复发性流产患者及正常经产妇对照的KIR及HLA-C基因多态性进行研究和对比分析，探索其与RSA发生的相关性，为RSA预防提供遗传学理论依据，为评估患者再发风险、指导治疗及再次生育奠定基础。资料与方法1.资料来源：本研究收集了2015年9月至2016年9月期间就诊于郑州大学人民医院的连续两次及以上在28周之前自然流产，未生育过孩子的患病夫妇资料。所有RSA夫妇行染色体核型分析及病因检查，排除遗传因素、解剖因素、感染因素、免疫因素、精子质量、内分泌紊乱

6、、血液高凝及全身性疾病引起的流产发生。对所有可获得的自然流产胚胎组织行拷贝数变异（copynumbervariants,CNV）检测排除染色体异常引起的流产。110名RSA女性(平均年龄28.3岁,年龄19-39岁)符合不明原因复发性流产条件被招募入组。2015年11月至2016年9月于河南省红十字血液中心收集至少生育过一个健康孩子且没有自然流产史的健康经产妇105名(平均年龄26.2岁,年龄18-39岁)作为对照组。所有参与成员已签署知情同意。2.实验方法：留取外周血样5ml装入含乙二胺四乙酸(e

7、thylenediminetetra-aceticaid,EDTA)抗凝管，4℃冰箱保存。采用血液基因组提取试剂盒（天根）提取所有参与成员的外周血全基因组DNA，使用NanoDrop2000对样品DNA进行定量及质量控制。采用Invitrogen公司的KIR基因分型试剂盒（KIRGenotypingSSPKit）运用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerasechainreaction-sequencespecificprimers,PCR-SSP)方法对KIR基因分型进行检测。PCR扩增产物用

8、2%琼脂糖凝胶150V电泳30分钟。紫外灯下观察跑胶结果并拍照。HLA-C基因根据第二外显子77和80位氨基酸不同分为C1、C2两型，分型用设计引物PCR扩增方法。3.统计学方法：应用SPSS(StatisticPackageforSocialScience)17版本软件所有KIR与HLA-C基因数据进行统计分析。P＜0.05存在统计学差异。结果1.KIR基因频率在病例组和对照组的分布我们对病例组（110例）和对照组（105例）样本进行了16种KIR基因的II分型。结