mmp―9与timp―1在复发性流产中的基因表达及相关性研究

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1、MMP-9与TIMP-1在复发性流产中的基因表达及相关性研究［摘要］目的检测MMP-9、TIMP-1在复发性流产绒毛组织中的mRNA相对表达量，研究MMP-9和TIMP-1的表达失衡与复发性流产的相关性。方法选取2013年4〜12月我院妇科门诊正常早孕和复发性流产妇女的绒毛组织各19例和28例，RT-PCR检测MMP-9、TIMP-1的相对表达量。结果复发性流产组绒毛MMP-9mRNA的相对表达量为4.11±0.42,正常早孕组绒毛MMP-9mRNA的相对表达量为2.45±0.36,两组比较差异有统计学意义(P0

2、.05)。结论复发性流产绒毛组织中的MMP-9mRNA表达量显著下降，TIMP-1mRNA表达量升高，MMP-9和TIMP-1的表达失衡参与了复发性流产的发生、发展。［关键词］复发性流产；MMP-9；TIMP-1［中图分类号］R714.21［文献标识码］A［文章编号］1674-4721(2015)08(a)-0093-04自然流产连续发生三2次称为复发性流产，复发性流产临床较常见，近年来其发病有上升趋势，严重影响患者的身心健康，影响家庭幸福和社会健康发展，因此探求复发性流产的发病机制，为临床治疗和预防复发性流产提

3、供科学依据有重要意义。本研究采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测不明原因复发性流产和正常早孕绒毛组织中MMP-9及TIMP-1mRNA相对表达量，通过比较两组MMP-9和TIMP-1的基因表达水平，探讨MMP-9和TIMP-1动态失衡与复发性流产发生、发展的关系，从分子水平研究复发性流产的发生、发展机制。1资料与方法1.1一般资料研究对象为2013年4〜12月在我院妇科门诊就诊患者，年龄18〜35岁，月经周期5〜7/28〜30d,停经45〜60cl,经临床妇科检查、B-HCG和孕酮、彩超证实为宫内妊娠，自愿

4、选择人工流产的宫内妊娠活胎19例和复发性流产28例（自然流产三2次，各项检查提示胚胎停育）。流产前两组病史、年龄、孕产次、停经天数均无明显差异。1.2标本米集1.2.1正常早孕组19例彩超提示：宫内单活胚。常规负压吸宫术选取吸出物中的绒毛组织，液氮冻存。1.2.2复发性流产组28例彩超提示：宫内妊娠未压吸宫术，留取绒毛组织液氮冻存。见胎心,结合B-HCG和孕酮，确诊为胚胎停育,行负1.3研究方法1.3.1试剂DNAExtractionkit(BioFlux),Taqpolymerase(BioCer),Realt

5、imePCRMasterMix(BioCer),ProbeGAPDH(BioRad),ProbeMMP9和TIMPl(BioRD)均购于深圳市中生生物技术公司。1.3.2组织总RNA提取①取10〜30rng组织块，放入6mm陶瓷研钵中，加入液氮，剪成1mm见方小块，用陶瓷研磨杵充分研磨，直至成粉；②将研磨好的粉末迅速转入1.5ml离心管中，离心管中预先加入600uITrizol溶液，充分颠倒混匀，室温静置5min；③转移上清液至吸附柱中，吸附柱套上新的离心管，12000r/min,离心30s；④弃去外套管中液体，

6、向吸附柱中加入600uI洗脱液,12000r/min,离心30s；⑤重复步骤④一次；⑥弃去管中液体，空柱12000r/min,离心lmin；⑦将吸附柱转移到新的离心管，加入20»1洗脱液，12000r/min,离心30s。管中液体即为提取的总RNA溶液,立即用于下游实验或-80°C冻存。1.3.3目的基因和内参基因引物序列及产物特征见表1＞图lo图1显示部分目的基因扩增曲线的情况，横坐标表示PCR循环数，纵坐标表示基因表达量的荧光度,基因扩增曲线与横线的交汇点表示CT值，目的基因表达浓度越高，CT值越小。A：TI

7、MP-1基因扩增曲线；B：MMP-9基因扩增曲线图1目的基因扩增曲线图1.4统计学分析采用SPSS17.0统计软件对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，计数资料用百分率(%)表示，米用x2检验，以P3讨论复发性流产在育龄妇女中的发生率约为l%[l]o复发性流产不仅给孕妇带来心理创伤，甚至会影响到以后的妊娠结局[2],可能导致日后不孕。约50%的复发性流产病因尚未明确[3],滋养细胞具有高度增殖和浸润性生长的潜能⑷，但在正常胚胎植入和胎盘形成时，滋养细胞不会发生过度增殖，侵袭性生长具有严格的时间性和空间

8、性，限于孕早期及子宫壁的1/3处,提示机体可能通过细胞因子调控滋养细胞的生长，使其保持动态平衡。细胞外基质(ECM)是细胞之间的物质，是由大分子构成的错综复杂的网络，是阻止细胞浸润性生长的重要屏障[5]。基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMPs)是降解和再塑造细胞外基质的Zn2+依赖性中性蛋白酶家族，对维持细胞外基质的动态平衡起重要作用。M