丙戊酸钠联合三氧化二砷对HL-60细胞株的体外研究.doc

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1、丙戊酸钠联合三氧化二砷对HL-60细胞株的体外研究【摘要】目的：探讨丙戊酸钠（sodiumvalproate，SV）联合三氧化二砷(arsenoustrioxide，As2O3)诱导HL-60细胞凋亡与bcl-2﹑baxmRNA之间可能的关系。方法：在对数生长期的HL-60细胞中分别加入不同浓度的SV和1.0μmol/LAs2O3，采用MTT比色法测定细胞生长抑制率，用AnnexinV-FITC/PI双重标记经流式细胞仪检测细胞早期凋亡率，RT-PCR检测bcl-2，baxmRNA在细胞中的表达。结果：SV抑制HL-60细胞生长并促进其凋亡，SV联合1.0μmol/LAs2O3对HL-60细

2、胞的生长抑制及促凋亡作用更明显。SV单独或联合1.0μmol/LAs2O3作用于HL-60细胞，bcl-2mRNA表达下降，baxmRNA表达增高。结论：SV与As2O3有协同作用，抑制HL-60细胞生长并诱导其凋亡，bcl-2﹑baxmRNA的表达变化可能参与了SV对HL-60细胞的促凋亡作用。【关键词】丙戊酸钠；三氧化二砷；HL-60细胞；凋亡；Bcl-2；Bax[Abstract]Objective:TostudythegrowthinhibitionandapoptosisofHL-60cellsaffectedbythecombinationofsodiumvalproate(SV

3、)andarsenoustrioxide(As2O3),andtoexploretherelationshipbetweentheapoptosisofHL-60cellsinducedbythecombinationofSVandAs2O3andtheexpressionofbcl-2andbaxmRNA.Methods:VariousconcentrationsofSVand1.0μmol/LAs2O3wereaddedtoexponentialgrowthHL-60cells.MTTassayswereusedtomeasurethegrowthinhibitoryeffectofco

4、mbinationofSVandAs2O3.Flowcytometrywasusedtoevaluatetheirapoptosis.RT-PCRwasadoptedtomeasuretheexpressionofbcl-2andbaxmRNA.Results:SVwasabletoinducegrowthinhibitionandapoptosisinHL-60cells.SVcouldenhancethegrowthinhibitionandapoptosisinducedby1.0μmol/LAs2O3alone.Theexpressionofbcl-2mRNAinHL-60cells

5、culturedwithSVorthecombinationofSVandAs2O3decreasedobviously,buttheexpressionofbaxmRNAincreased.Conclusion:CombinationofSVandAs2O3cansynergisticallyinactivateHL-60cells,inhibitthecellproliferationandinduceapoptosis.TheinductionofapoptosisinducedbySVorthecombinationofSVandAs2O3maybemediatedbydown-ex

6、pressbcl-2mRNAandbyup-expressbaxmRNA.[Keywords]Sodiumvalproate；Arsenoustrioxide;HL-60cells；Apoptosis；Bcl-2;Bax4白血病是由于造血系统中某一系列细胞的异常增生，并在骨髓、肝、脾、淋巴结等各脏器广泛浸润的造血系统恶性肿瘤。传统的化疗药物在杀伤白血病细胞的同时，对正常骨髓细胞也产生不同程度的破坏。新型的化疗药物组蛋白脱乙酰基(histonedeace-tylase，HDAC)抑制剂在体外对多种肿瘤细胞系有抑制增殖、诱导凋亡及分化的作用，而对正常造血细胞无严重毒性，且与多种现有化疗药物有协同

7、作用[1]。丙戊酸钠这种长期在临床上被当作抗癫痫药使用的支链羧酸制剂，近来被发现可以抑制HDAC，特别是Ⅰ型HDAC[2]。本次研究旨在以急性髓系白血病细胞株HL-60为靶细胞，通过联合使用丙戊酸钠、三氧化二砷(As2O3)，观察丙戊酸钠对白血病细胞增殖、凋亡的影响，并初步探讨其作用的可能机制。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞株急性髓系白血病细胞株HL-60（中科院上海细胞生物所）。1.1.2药品与主要试