丙戊酸钠联合三氧化二砷对hl

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1、丙戊酸钠联合三氧化二砷对HL【摘要】目的：探讨丙戊酸钠（sodiumvalproate，SV）联合三氧化二砷(arsenoustrioxide，As2O3)诱导HL-60细胞凋亡与bcl-2﹑baxmRNA之间可能的关系。方法：在对数生长期的HL-60细胞中分别加入不同浓度的SV和1.0μmol/LAs2O3，采用MTT比色法测定细胞生长抑制率，用AnnexinV-FITC/PI双重标记经流式细胞仪检测细胞早期凋亡率，RT-PCR检测bcl-2，baxmRNA在细胞中的表达。结果：SV抑制HL-

2、60细胞生长并促进其凋亡，SV联合1.0μmol/LAs2O3对HL-60细胞的生长抑制及促凋亡作用更明显。SV单独或联合1.0μmol/LAs2O3作用于HL-60细胞，bcl-2mRNA表达下降，baxmRNA表达增高。结论：SV与As2O3有协同作用，抑制HL-60细胞生长并诱导其凋亡，bcl-2﹑baxmRNA的表达变化可能参与了SV对HL-60细胞的促凋亡作用。【关键词】丙戊酸钠；三氧化二砷；HL-60细胞；凋亡；Bcl-2；Bax[Abstract]Objective:Tostudy

3、thegrovalproate(SV)andarsenoustrioxide(As2O3),andtoexploretherelationshipbetRNA.Methods:VariousconcentrationsofSVand1.0μmol/LAs2O3easurethegroetryeasuretheexpressionofbcl-2andbaxmRNA.Results:SVol/LAs2O3alone.Theexpressionofbcl-2mRNAinHL-60cellscultur

4、edRNAincreased.Conclusion:binationofSVandAs2O3cansynergisticallyinactivateHL-60cells,inhibitthecellproliferationandinduceapoptosis.TheinductionofapoptosisinducedbySVorthebinationofSVandAs2O3maybemediatedbydoRNAandbyup-expressbaxmRNA.[Keyvalproate；Ars

5、enoustrioxide;HL-60cells；Apoptosis；Bcl-2;Bax白血病是由于造血系统中某一系列细胞的异常增生，并在骨髓、肝、脾、淋巴结等各脏器广泛浸润的造血系统恶性肿瘤。传统的化疗药物在杀伤白血病细胞的同时，对正常骨髓细胞也产生不同程度的破坏。新型的化疗药物组蛋白脱乙酰基(histonedeace-tylase，HDAC)抑制剂在体外对多种肿瘤细胞系有抑制增殖、诱导凋亡及分化的作用，而对正常造血细胞无严重毒性，且与多种现有化疗药物有协同作用[1]。丙戊酸钠这种长期在临床上

6、被当作抗癫痫药使用的支链羧酸制剂，近来被发现可以抑制HDAC，特别是Ⅰ型HDAC[2]。本次研究旨在以急性髓系白血病细胞株HL-60为靶细胞，通过联合使用丙戊酸钠、三氧化二砷(As2O3)，观察丙戊酸钠对白血病细胞增殖、凋亡的影响，并初步探讨其作用的可能机制。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞株急性髓系白血病细胞株HL-60（中科院上海细胞生物所）。1.1.2药品与主要试剂RPMI-1640培养液、胎牛血清（美国Gibco公司）；丙戊酸钠(SV)注射液（杭州赛诺菲圣德拉堡民生制药有限公司）；A

7、s2O3注射液（哈尔滨伊达药业有限公司）；DMSO、MTT（美国Sigma公司）；Annexin-V/PI细胞凋亡测定试剂盒、RT-PCR两步法试剂盒（上海晶美生物工程有限公司）。1.2方法1.2.1细胞培养将HL-60细胞置于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养体系中，在37℃、5%体积分数的CO2、饱和湿度下培养，48~72h传代1次。1.2.2MTT法取对数生长期HL-60细胞接种于96孔板，每孔接种约1.5×103个细胞。实验分4组：对照组（只加培养液）、SV组（SV的终浓度分别为0

8、.5、1.0、2.0和4.0mmol/L）、As2O3组（1.0μmol/L）、SV+As2O3组（SV的终浓度分别为0.5、1.0、2.0和4.0mmol/L，As2O3均为1.0μmol/L）。每组设3个复孔，24、48、72h后检测。检测前4h加入5mg/mlMTT20μl，继续培养4h后，水平离心，吸干上清，加入DMSO150μl震荡5min，490nm测定吸光度（OD值）。重复3次。细胞生长抑制率=（1－实验组OD值/对照组OD值）×100%1.2.3AnnexinV-FITC/PI双