临床分离鲍曼不动杆菌耐药基因abeM的研究.doc

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1、临床分离鲍曼不动杆菌耐药基因abeM的研究作者：苏显中房婷沈峰户登【摘要】目的探讨临床分离鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii，Ab)耐药的分子机制。方法以临床分离的Ab35、Ab36染色体DNA为模板扩增abeM基因，对abeM基因扩增产物进行DNA测序及同源性分析；将abeM基因扩增产物与载体连接后转化入大肠埃希菌KAM32感受态细胞中，对转化子进行药敏分析。结果Ab35和Ab36的abeM基因扩增产物与已报道的abeM基因核苷酸序列同源性分别达99%和98%，Ab35的abeM结构基因推导的氨基酸序列发生了3个

2、氨基酸残基变异，Ab36的2个氨基酸残基发生了变异；含有Ab36的abeM基因的转化子具有更广和更强的耐药图谱；两种转化子的耐药性均能被药物外排泵抑制剂CCCP和维拉帕米逆转。结论鲍曼不动杆菌药物外排蛋白AbeM中氨基酸残基Val52、Gln203及Ser256对多重耐药强度具有重要作用，药物外排泵抑制剂可有效抑制AbeM蛋白的耐药活性。【关键词】多重耐药；基因克隆；鲍曼不动杆菌ABSTRACTObjectiveToinvestigatethemolecularmechanismofdrugresistanceinAcinetobact

3、erbaumannii(Ab)clinicalisolates.MethodsPCRamplificationofdrugresistancegeneabeMwascarriedoutusingchromosomalDNAofAb35andAb36clinicalisolatesastemplate.PCRproductofabeMgenewassequenced.ThenucleotidesequencesanddeducedaminoacidsequenceswereanalyzedbyBLASTofNCBI.Aftercellsof

4、EscherichiacoliKAM32transformedwithaplasmidcarryingtheabeMgenePCRproduct,MICsofvariousdrugsweredeterminedbyserialtwofolddilutionmethod.ResultsPCRproductofAb35orAb36shared99%and98%identitieswiththegeneabeMinAbATCC19606whichhadbeenreported,respectively;threeaminoacidresidu

5、esmutatedindeducedaminoacidsequencesofabeMstructuregenefromAb35,tworesiduesmutatedindeducedaminoacidsequencesofabeMstructuregenefromAb36;thedrugresistancewaswiderandstrongerforthetransformantscarryingabeMgeneofAb36;thedrugresistanceoftwokindsoftransformantscouldbereversed

6、byCCCPandverapamil,twodrugeffluxpumpinhibitors.ConclusionTheaminoacidresiduesVal52,Gln203andSer256ofAbeMplayedtheimportantrolesintheintensityofmultipleresistance;thedrugeffluxpumpinhibitorsCCCPandverapamilcouldeffectivelyinhibitedthedrugresistanceofAbeM.KEYWORDSMultiplere

7、sistance;Genecloning;Acinetobacterbaumannii5鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii，Ab)是一种好氧的非发酵类革兰阴性杆菌。由于能够引起诸如肺炎、泌尿器官感染、心内膜炎、伤口感染、脑膜炎及败血病等，Ab已成为ICU的重要致病菌［1］。近年来Ab在世界范围内逐渐呈现多重耐药趋势，2004年9月据我国台湾地区报道一种超强细菌“泛耐药性鲍曼不动杆菌”在台湾多家医院蔓延，其对处方药物普遍存在抗性，患者的病死率高达60%［2］。我们在AbATCC19606的染色体DNA上已克隆出了ab

8、eM多药外排基因，其编译的多药外排泵AbeM受质子电化学势驱动，能够将许多结构与功能不同的药物主动排到细胞之外［3］。本文对两株临床分离鲍曼不动杆菌的abeM基因进行了克隆，并分析了多药外排泵