欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:17492126
大小:33.00 KB
页数:5页
时间:2018-09-02
《蛋白激酶C参与脂多糖诱导肺微血管内皮细胞VEGF表达.doc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、蛋白激酶C参与脂多糖诱导肺微血管内皮细胞VEGF表达作者:葛海燕,冯健,贲素琴,倪松石【摘要】 目的:观察蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)在内毒素/脂多糖(lipopolysacchride,LPS)诱导血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达上调中可能发挥的作用。方法:以肺微血管内皮细胞为研究对象,用PKC抑制剂预处理内皮细胞,以RT-PCR检测VEGFmRNA水平的表达变化;WesternBlot检测其蛋白质水平的表达变化。结果:(1)VEGFmRNA的表
2、达水平与LPS呈剂量和时间依赖的关系;(2)PKC抑制剂calphostinc预处理内皮细胞能显著抑制LPS诱导VEGFmRNA和蛋白的表达。结论:LPS可能通过PKC信号通路而诱导肺微血管内皮细胞VEGF表达上调。【关键词】脂多糖蛋白激酶C肺血管内皮细胞血管内皮细胞生长因子 [Abstract]Objective:Toinvestigatewhetherlipopolysacchride(LPS)-inducedvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)expressionwasmediatedbypr
3、oteinkinaseC(PKC).Methods:Theratpulmonarymicrovascularendothelialcells(RPMVECs)werechallengedwithLPSbeforePKCinhibitor(calphostinc)orvehicle,thelevelsofVEGFmRNAwereassayedbyRT-PCR,andthelevelsofVEGFproteinwereassayedbyWesternBlot.Results:LPSinducedVEGFexpressionattimeandd
4、osedependentmannerinRPMVEC.PretreatmentofthesecellswiththePKCinhibitor(calphostinc)markedlyinhibitedtheLPS-inducedVEGFexpression.Conclusion:LPSmayinduceVEGFexpressioninRPMVECmediatedinpartbyPKCsignalpathway. [Keywords]Lipopolysaccharide;ProteinkinaseC;Pulmonarymicrovascu
5、larendothelialcell;Vascularendothelialgrowthfactor血管内皮细胞(vascularendothelialcell,VEC) 处在血液与血管平滑肌细胞之间,能分泌多种生理活性物质,调节血管功能,血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)即为其中之一。VEGF具有促进VEC分裂、诱发新血管形成及增加血管通透性的作用[1,2]。本文以培养的肺微血管内皮细胞为模型,以细菌脂多糖(lipopolysacchride,LPS)为诱导因素,从VEGF
6、和蛋白激酶C(proteinkinasec,PKC)着手,以阐明其发生机制。 1材料和方法 1.1材料LPS(Escherichiacoli,0111:B4),calphostin5C均购自Sigma公司,DMEM培养基和Trizol试剂购自GibcoBRL公司,小牛血清购自Hyclone公司,细胞培养板购自Corning公司,VEGF多克隆抗体购自SantaCruz公司,ECLWestern检测系统购自CellSignal公司;PCR逆转录试剂盒购自FermentasMBI公司。 1.2方法 1.2.1大鼠肺微血管内皮细胞分离培
7、养和处理大鼠肺微血管内皮细胞的分离,培养参照Chen等的方法[3],将新生1d的SD仔鼠处死,乙醇浸泡消毒5min,取出肺组织用PBS冲洗,将肺的周边切割成1mm×1mm×1mm大小组织块,用吸管将组织块均匀放置在培养瓶内,间距约1cm。加入含10%胎牛血清、105U/L青霉素、100mg/L链霉素的DMEM培养基,放入37℃、含5%CO2、湿度为95%~100%的孵箱内,静置培养60h后去除组织块。3~4d更换1次培养液。第1~2周80%~90%细胞单层汇合时,用0.5%胰蛋白酶消化后按1∶3传代。实验用2~5代细胞。相差显微镜下,细胞
8、呈典型的铺路石状排列,采用CD31抗原间接免疫荧光染色进行鉴定。实验开始前细胞无血清培养24h。实验细胞分为:(1)正常对照组和用不同浓度LPS刺激内皮细胞24h,分别测定VEGFmRNA和蛋
此文档下载收益归作者所有