损伤反应性星形胶质细胞对成年大鼠室下区的再生作用.doc

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1、损伤反应性星形胶质细胞对成年大鼠室下区的再生作用作者：屈建强　贺西京　杨平林　杨涛【摘要】　　目的①观察液压性脑损伤后不同时期室下区Nestin和GFAP的表达及其细胞类型。②分离脑损伤室下区Nestin+/GFAP+共存细胞进行培养、诱导分化鉴定。方法①用液压冲击法建立SD大鼠动物模型，用免疫组化和免疫荧光双标法分析和显示不同时期(1、3、5d，1、2、3、4、6、8周)Nestin和GFAP的表达变化以及细胞类型。②分离液压损伤SD大鼠室下区Nestin+/GFAP+共存细胞，制成单细胞悬液，进行培养、传代，以免疫荧光化学方法对原代和传代培养形成的神经球以及诱导分化

2、的细胞进行鉴定。结果①室下区免疫荧光染色：正常组及空白对照组在前脑侧脑室SVZ区出现神经干细胞，主要集中在外侧壁上部和上角，其他部位及三脑室的SVZ区有少量神经干细胞。脑损伤模型组脑损伤24h后，和正常组相比，室下区Nestin和GFAP的表达显著增加，阳性表达在3d后逐渐达到高峰，持续1周。②在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖，形成悬浮生长的呈Nestin阳性的神经球；神经球贴壁后分化的细胞表现为少突胶质细胞、神经元和星形胶质细胞的形态，且分别呈GalC阳性、βtublinⅢ阳性和GFAP阳性。结论①成年大鼠液压性脑损伤可诱导室下区表达Nestin和GFAP，

3、Nestin的表达和反应性星形胶质细胞增生呈正相关，且表达多相互共存，并且具有星形胶质细胞的形态；室下区的星形胶质细胞和神经干细胞都对脑损伤都有反应，并可能参与中枢神经系统损伤修复。②成年大鼠液压性脑损伤后分离的室下区细胞具有自我更新能力和多分化潜能，可以分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞，是中枢神经系统的干细胞。【关键词】脑损伤；反应性星形胶质细胞；神经干细胞；再生；室下区　　Effectsonregenerationinsubventricularzoneaboutinjuried　reactiveastrocytefollowingbraininjuryin

4、adultrats　　ABSTRACT:Objective①Usingimmunohistochemicalmethodandimmunofluorescence,theexpressionsofNestinandglialfibrillaryacidicprotein(GFAP)insubventricularzoneofratswithhydraulicinjury,aswellasitscelltypeswereobservedindifferentperiod.②ThecoexistingcellsofNestin+/GFAP+wereculturedandin

5、ducedtodifferentiate.Methods①Animalmodelwasestablishedbymoderatelateralfluidpercussion.ExpressionandcelltypesofNestinandGFAPindifferentperiod(1d,3dand5d;1w,2w,3w,4w,6wand8w)weremeasuredbyimmunohistochemicalmethodandimmunofluorescence.②CoexistingcellsofNestin+/GFAP+wereseparatedfromsubven

6、tricularzoneofSDratstomakesinglecellsuspension.Andthen,thecellswereculturedandsubcultured.Next,primaryandsubculturing9neuronosphereaswellasprimaryandsubculturingdifferentiatedcellsweremeasuredwithimmunofluorescence.Results①Immunofluorescencestainingresults:Fornormalcontrols,smallnerveste

7、mcellsofroundorfusiformshapeappearedinSVZofprosencephalonlateralventricle,mainlyinupperpartoflateralwallandcorn.FewnervestemcellswerelocatedinSVZoflateralventricleand3rdbrainventricle.Braininjury:24hoursafterbraininjury,expressionofNestinandGFAPincreasedobviouslyandreache