ppt-7·3黄曲霉毒素测定

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1、7·3黄曲霉毒素测定黄曲霉毒素的测定黄曲霉毒素（Aflatoxins,简写AFT），是黄曲霉、寄生曲霉及温特曲霉等产毒株的代谢产物，是一群结构类似的化合物。目前已发现17种黄曲霉毒素，根据其在波长为365nm紫外光下呈现不同颜色的荧光而分为B、G二大类，其中B大类在氧化铝薄层板上于紫外光下呈现蓝色荧光，而G大类则呈绿色荧光。黄曲霉毒素属剧毒物质，其毒性比氰化钾还高，也是目前最强的化学致癌物质。其中AFTB1的毒性和致癌性最强，帮其在食品中允许量各国都有严格规定。AFT主要污染粮油及其制品，如花生、花生油、玉米、大米、棉籽等被污染严重。黄曲霉毒素允许量标准食品品种　　允许量标准（

2、ppb或10-6）玉米、花生、花生油≤20玉米及花生制品≤20大米、其他食用油≤10裱花蛋糕、饼干、面包≤5婴儿代乳食品　　　　不得检出本章重点薄层层析法测黄曲霉毒素薄层层析是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术。自1990年，它被列为AOAC(associationofofficialagriculturalchemists)标准方法，该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能。。原理本法是利用样品中的黄曲霉毒素B1，经有机溶剂提取、净化、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外光下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定黄曲霉毒素B1的含量。薄层色谱法黄曲

3、霉毒素Bt的最低检出量为0．0004ug，最低检出浓度为5ug／Kg。仪器小型粉碎机样筛电动振荡器玻璃浓缩器玻璃板5cm×20cm、薄层板涂布器展开槽(25cm×6cm×4cm)紫外光灯100一125w、波长365nm滤光片、微量注射器试剂三氯甲烷、正己烷(沸程30～60℃)或石油醚(沸程60～90℃)、甲醇、苯、乙腈、无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水、丙酮。以上试剂在试验前需先进行空白试验，如不干扰测定即可使用，否则需逐一进行重蒸。吸附剂－－硅胶薄层层析用硅胶有多种规格。应用最多的是掺有粘合剂石膏的硅胶，称有硅胶G，其掺入的石膏量为5-20%不等。硅胶有时含有铁盐及氯离子等杂质

4、，它们可被展开剂提取出来，对层析的结果产生一定影响。硅胶H――不含粘合剂和其他添加剂（不会被展开剂提出杂质）。硅胶HF254――掺有荧光指示剂，可在短波254纳米的紫外光下观察到荧光。硅胶GF254――含石膏及荧光物质。黄曲霉毒素B1标准溶液1、黄曲霉毒素B1标准贮备液：准确称取1～1．2mgAFTB1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光、于冰箱4℃保存。此标准液浓度约为10ug／mL。先用紫外分光光度计测定其浓度，再用苯一乙腈混合液调整其浓度为准确10．0ug／mL。在350nm，AFTB在苯一乙腈(98+2)混合液中的摩尔消光系数为19800.2、黄

5、曲霉毒素B标准使用液：I液(1.0ug／mL)：取1mLAFTB标准液(10.0ug／mL)于10mL容量瓶中，用苯一乙腈混合液稀释、定容。Ⅱ液(0.2ug／mL)：取I液1mL，按上法定容5mL。Ⅲ液(0.04ug／mL)：取液Ⅱ1mI。，按上法定容5mI。。思考：在配制黄曲霉毒素B标准使用液时，为什么需要用贮备液来稀释而不是直接配制？次氯酸钠溶液配制：取100g漂白粉，加入500mL水，搅拌均匀。另将80g工业用碳酸钠(Na2CO3·H2O)溶于500mL温水中。将两液合并、搅拌、澄清、过滤。此液含次氯酸25g／L。思考题：1、次氯酸钠溶液的作用是什么？消毒用，污染的玻璃器

6、皿用次氯酸钠溶液浸泡可达到去毒的效果。2、为什么次氯酸钠溶液能起到消毒的作用？操作步骤样品处理→提取→浓缩→薄板制备→点样→展开→定量(1)样品处理样品从大样经粗碎及连续多次用四分法缩减至0．5～lkg后全部粉碎。粮食样品全部通过20目筛，花生样品全部通过10目筛、混匀。(2)提取称取20.00g经粉碎样品，置于250mL具塞锥形瓶中，加30mL正己烷或石油醚和100mL甲醇水清液。振荡30min，静置片刻，以叠成折叠式的快速定性滤纸过滤于分液漏斗中，待下层甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一具塞锥形瓶内。取20.00mL甲醇水溶液置于另一125mL分液漏斗中，加20mL三氯

7、甲烷，振摇2min、静置分层，如出现乳化现象，可滴加甲醇促使分层。放出三氯甲烷层，经盛有约10g预先用三氯甲烷湿润的无水硫酸钠的定量慢速滤纸，过滤于50mL蒸发皿中，再加5mL三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并于蒸发皿中。浓缩将蒸发皿放在通风柜，于65℃水浴上通风挥干，然后于冰盒上冷却2～3min后，准确加入1mL苯一乙腈混合液。用带橡皮头的滴管的管尖将残渣充分混合，再用此滴管吸取上清液转移于2mL的具塞试管中。注意：若有苯的结