2015版药典黄曲霉毒素测定法

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1、2351黄曲霉毒素测定法1第一法本法系用高效液相色谱法(通则0512)测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计)，除另有规定外，按下列方法测定。当测定结果不符合规定时，以第二法测定结果为准。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)为流动相；采用柱后衍生法检测，（1）碘衍生法：衍生溶液为0.05％的碘溶液(取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成)，衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；（2）光化学衍生法：光化学

2、衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm(或365nm)，发射波长λem=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0μg／ml、0.3μg／ml、1.0μg／ml、0.3μg／m1)0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。供试品溶液的制备取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入

3、70％甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000转／分钟)，离心5分钟(离心速度2500转／分钟)，精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另

4、精密吸取上述供试品溶液20~25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。【附注】(1)本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。(2)残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器(装有10％次氯酸钠溶液)内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。12010年版药典第二增补本修订该法，增加光化学衍生法。2第二法本法系用高效液相色谱-串联质谱法测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素，除另有规定外，按下列方法测定。色谱条件与系统适用性试验以十

5、八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25℃，以甲醇为流动相A相，以10mmol/L醋酸铵水溶液为流动相B相，流速0.3ml/min；按下表进行梯度洗脱：流动相梯度时间/minA相/%B相/%065354.51585601006.56535106535以三重四极杆质谱仪作为检测器，电化学喷雾离子源，采集模式为正离子模式，各化合物质谱参数见下表：黄曲霉毒素测定质谱参数表去簇电压碰撞能量碰撞能量名称定量离子定性离子1（DP：伏）（CE：伏）（CE：伏）黄曲霉毒素G255331.1/313.133331.1/245.140黄曲霉毒素G160329.1/243.135329

6、.1/311.130黄曲霉毒素B255315.0/259.135315.0/287.140黄曲霉毒素B160313.1/241.050313.1/285.040混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml、）适量，用70％甲醇稀释成含黄曲霉毒素B2、G2浓度为0.04～3ng/ml，含黄曲霉毒素B1、G10.12～10ng/ml的系列对照品溶液，即得（测定时可根据样品实际情况，制备混合对照品溶液或基质混合对

7、照品溶液）。供试品溶液的制备取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，置于均质杯中，加入氯化钠3g，精密加入70％甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转／分钟），离心5分钟（离心速度2500转／分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。2增订第二法。测定法精密吸取上述混合对照品溶液各5µl，

8、注入液相色谱－质谱仪，测