中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）B类清道夫受体（EsSR-B1）调控血细胞吞噬的功能研究

《中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）B类清道夫受体（EsSR-B1）调控血细胞吞噬的功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、2018届研究生硕士学位论文分类号：071002学校代码：10269密级：学号：51151300092EastChinaNormalUniversity硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：中华绒螯蟹（Eriocheirsinensis）B类清道夫受体（EsSR-B1）调控血细胞吞噬的功能研究院系：生命科学学院专业：动物学研究方向：无脊椎动物免疫学指导教师：李伟微副研究员学位申请人：吴耀萌2018年4月2018DissertationforMasterDegreeSchoolCode

2、:10269StudentID:51151300092EastChinaNormalUniversityPhagocytosisfunctionresearchofClassBScavengerReceptor(EsSR-B1)inhemocytesofChineseMittenCrab(Eriocheirsinensis)Department:SchoolofLifeScienceMajor:ZoologyResearchDirection:InvertebrateImmunologTutor:A.P.W

3、eiweiLiMasterCandidate:YaomengWuApril,2018华东师范大学2018届硕士学位论文吴耀萌硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名职称单位备注冷向军教授上海海洋大学主席杜震宇教授华东师范大学委员李二超教授海南大学委员乔芳工程师华东师范大学答辩秘书IV华东师范大学2018届硕士学位论文内容摘要清道夫受体（SRs）是重要的模式识别受体（PRRs），通过识别病原相关分子模式（PAMPs）在宿主防御病原体中发挥重要作用。B类清道夫受体在虾中已证实具有促进吞噬的功能，基于此，我们探究B类清

4、道夫受体是否在中华绒螯蟹（Eriocheirsinensis）中也具有促进吞噬的能力。在本研究中，我们首次从中华绒螯蟹中发现并鉴定了的一种B类清道夫受体（EsSR-B1）。我们鉴定出，EsSR-B1是由包含2726个核苷酸的基因编码的500个氨基酸的蛋白质，具有1503bp的开放阅读框。我们发现EsSR-B1的结构域是进化保守的。通过qRT-PCR分析，EsSR-B1在中华绒螯蟹不同组织中可以广泛检测到，并且在肠和肝胰腺表达最高。经金黄色葡萄球菌或副溶血性弧菌刺激血细胞后，EsSR-B1基因表达量在中华绒螯

5、蟹血细胞中显著上调。通过原核表达技术表达得到EsSR-B1蛋白，并通过亲和层析对蛋白进行纯化，最后复性获得了具有功能的重组EsSR-B1蛋白。重组EsSR-B1蛋白可与细菌广泛结合（包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌），进而引发并促进血细胞被细菌刺激时的吞噬作用。随后，基于在中华绒螯蟹血细胞中的RNA干扰技术，通过免疫荧光实验和流式细胞仪检测吞噬率，我们发现干扰了EsSR-B1基因表达之后，确实血细胞的吞噬能力有所下降。此外，在干扰了EsSR-B1基因的血细胞中，用金黄色葡萄球菌或副溶血性弧菌刺激后，相关抗菌肽

6、基因的表达量降低。本研究不仅发现了EsSR-B1在细菌结合和随后促进血细胞吞噬作用中起到了关键作用，而且为中华绒螯蟹的清道夫受体研究开辟了新的思路，丰富了中华绒螯蟹的先天免疫研究。关键词：中华绒螯蟹，EsSR-B1，吞噬作用，抗菌肽V华东师范大学2018届硕士学位论文ABSTRACTScavengerreceptors(SRs)areimportantpatternrecognitionreceptors(PRRs),whichplaysignificantrolesinhostdefenseagainst

7、pathogensbyidentifyingpathogen-associatedmolecularpatterns(PAMPs).ClassBscavengerreceptorshavebeenshowntopromotephagocytosisinshrimp.Inthisstudy,weinvestigatedtheabilityofClassBscavengerreceptorstopromotephagocytosisinEriocheirsinensis.Inthisstudy,wereport

8、thecloningandcharacterizationofaSRfromEriocheirsinensis(EsSR-B1)whichisa500aminoacidproteinencodedbyagenecomprisedof2726nucleotideswitha1503bpopenreadingframe.ThedomainsofEsSR-B1werefoundtobeevolutionarilycon