中华绒螯蟹(eriocheir sinensis)肠道围食膜的结构、功能及其对非淀粉多糖的响应

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1、学校代码:10285学号:20134221067SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文（学术学位）中华绒螯蟹（Eriocheirsinensis）肠道围食膜的结构、功能及其对非淀粉多糖的响应StructureandfunctionofperitrophicmembraneinintestineofEriocheirsinensisanditsresponsetodietarynon-starchpolysaccharides研究生姓名李婷指导教师姓名蔡春芳专业名称水生生物学研究方向水产动物营养所在院部医学部基础医学院与生物科学学院论文提交日期2016年4月万方数据中华绒螯蟹

2、（Eriocheirsinensis）肠道围食膜的结构、功能及其对非淀粉多糖的响应中文摘要I万方数据中文摘要中华绒螯蟹（Eriocheirsinensis）肠道围食膜的结构、功能及其对非淀粉多糖的响应II万方数据中华绒螯蟹（Eriocheirsinensis）肠道围食膜的结构、功能及其对非淀粉多糖的响应中文摘要中文摘要围食膜（Peritrophicmembrane,PM）是存在于大多数昆虫肠道内的半透性膜，被认为是有几丁质纤维丝与蛋白质连接成的网状结构，围食膜作为一个半透性屏障附衬在肠道内表面，类似于脊椎动物肠道内的粘液层，具有保护肠道上皮细胞不受粗燥食物颗粒磨损、阻止病原体入侵等

3、作用。除此之外，围食膜的腔室化作用，把肠腔分为围食膜内外两个腔，有利于营养物质的消化吸收。迄今为止，对昆虫围食膜的研究已经相当深入，并已成为预防害虫的有效靶标。甲壳动物也存在围食膜，然而，关于甲壳动物围食膜的形成及生物学特征的研究还鲜有报道。中华绒螯蟹是一种重要的水产养殖甲壳动物，本研究首先对中华绒螯蟹围食膜的结构和功能进行了研究，在此基础上又进一步研究了非淀粉多糖对围食膜的影响。实验一：研究旨在揭示中华绒螯蟹（Eriocheirsinensis）围食膜的分泌、形态和功能。选取处于蜕皮间期，平均体重30g左右的中华绒螯蟹，迅速处死获取消化道。采用组织切片技术和电镜技术观察了中华绒螯

4、蟹消化道及围食膜的基本形态；采用几丁质酶溶解法和SDS-PAGE电泳法研究了围食膜的基本组成成分；采用液相色谱电离串联质谱（LC-ESI-MS／MS）技术分析了组成围食膜蛋白质的种类。显微切片结果显示，中华绒螯蟹整个消化道表面都有围食膜存在，除中肠外围食膜区室化作用明显；围食膜与上皮细胞分离时，柱状细胞变成不规则圆形，核消失。电镜结果显示，围食膜形成时上皮细胞内含有大量线粒体和分泌泡；中肠上皮细胞表面密生微绒毛。几丁质酶对中华绒螯蟹食糜进行处理发现，围食膜能被几丁质酶溶解。围食膜蛋白质SDS-PAGE图谱显示有7条比较清晰的电泳条带，蛋白质分子量主要分布在40KD以上。LC-ESI

5、-MS／MS分析结果表明中华绒螯蟹围食膜蛋白主要包括钠、钾-ATP酶、ATP合成酶、肌动蛋白、微管蛋白、硫氧还原蛋白、加氧酶等。上述结果提示，中华绒螯蟹的围食膜由上皮细胞分泌形成，可能参与免疫、渗透调节和营养物质转运等生理过程。实验二：本实验旨在研究围食膜蛋白的分子生物学特点。采用RACE技术获得了两种围食膜蛋白基因全长cDNA序列。序列比对发现两种克隆序列与豌豆蚜红色获蚁peritrophin-44-like和赤拟谷盗peritrophins1-Hprecursor相似性较高分别为54%和70%，本研究将两个序列分别命名为Es-peritrophin-44-like（Es-PL4

6、4）III万方数据中文摘要中华绒螯蟹（Eriocheirsinensis）肠道围食膜的结构、功能及其对非淀粉多糖的响应和Es-peritrophins1-Hprecursor(Es-PP1)。全长序列分析显示，Es-PL44和Es-PP1基因cDNA序列全长分别为855bp和1611bp，分别编码267和468个氨基酸组成的蛋白质；氨基酸序列分析表明，Es-PL44和Es-PP1N端都含有一个信号肽序列，属于分泌性蛋白；蛋白质结构域分析表明，Es-PL44和Es-PP1分别含有3个和1个几丁质结合功能域（PeritrophinChitinBindingDomain,CBD）。序列比

7、对发现与斑节对虾卵巢围食膜1，斑节对虾卵巢围食膜2和对虾围食膜1的一致性很低，分别为16.32%和10.71%，14.02%和7.49%，17.01%和10.28%。系统进化分析表明，两种围食膜蛋白和昆虫的亲缘关系较近，和水生动物处于不同的分支，且Es-PL44和Es-PP1亲缘关系较远。把所获得基因全长cDNA序列提交至NCBI文库，获得了两个GenBank登录号，分别为：KU041138和KU041139。结果提示，Es-PL44和Es-PP1基因是两种含有几丁质