遗传病诊断医学课件

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1、第十三章遗传病的诊断DiagnosisofGeneticDisease概述临床常规诊断遗传学检测现症患者诊断症状前诊断产前诊断第一节现症患者诊断一、临床常规诊断（一）采集病史家史：亲缘、婚姻关系发病况绘系谱婚史:婚龄次数配偶况近婚生育史：育龄子女数流、死产史产伤病毒感染（二）症状与体征1.智力低下2.特殊面容3.特殊气味4.耳聋5.肝脾肿大糖原贮积病半乳糖血症粘多糖病6.皮肤毛发异常7.肢体畸形高高大矮手足8.生殖器变化？9.生长发育迟缓（三）实验室检查和辅助检查二、系谱分析(pedigreeanalysis)（一）系谱分析步骤：1.了解成员发病况2.绘制系

2、谱讲方法……3.判断遗传方式、基因型4.估计发病率5.处理意见注意：准确完整详细（二）孟德尔遗传病1.AD、AR、XD、XR、YL2.注意事项1）外显不全、隔代2）延迟显性3）新突变4）遗传异质性（多种遗传方式）例：先天性聋哑AR、AD、XR、环境特发先天性白内障CS畸变AD、AR、胎内感染特发（三）非孟德尔遗传病1.mt遗传病母系遗传遗传瓶颈晚发、进行性2.多基因病发病率比单基因病低（四）基因组印记与动态突变（略）三、细胞遗传学(cytogenetics)检查（一）CS检查1.CS检查指征：1）智力低，生长发育迟缓，先天畸形；2）夫妇之一有染色体异常；3）

3、家族中已有CS病患者；4）多发性流产妇女及其丈夫；5）原发闭经和女性不育；无精子症和男性不育；6）35岁以上高龄孕妇。7）两性畸形者8）身材高大，性情粗暴男性9）恶性血液病患者10）长期接受X线、电离辐射人员11）疑为先天愚型者；疑为脆性X综合征者。2.CS显带分析（前述）（二）性染色质检查：性染色体数目异常。不分裂细胞：X染色体数=X染色质数+1Y染色体数=Y染色质数2个X染色质（三）荧光原位杂交（前述）（fluorescenceinsituhybridization,FISH)用生物素或荧光素标记探针制备被测标本变性分子杂交荧光显微镜检测例1：21号CS

4、着丝粒探针例1例2四、生物化学检查（一）酶和蛋白质的分析--确定单基因病参表利用血液和特定的组织，细胞对酶的活性和蛋白质的含量进行检测。主要方法有：电泳技术，酶活性检测，层析技术，免疫技术，氨基酸顺序分析技术等。（二）代谢产物的检测--反映酶活性利用血液、尿液和羊水对代谢产物进行质和量的检测。主要方法有：血液滤纸片法，显色反应。五、基因诊断genediagnosis采用分子生物学方法在DNA水平或RNA水平对某一基因进行分析，从而对特定的疾病进行诊断。可基因诊断的疾病约1000种？（一）基因诊断的基本技术*包括：分子杂交技术；聚合酶链式反应(PCR)技术*D

5、NA序列测定技术；基因芯片技术1.分子杂交技术（molecularhybridization）1）原理：变性成单链→复性成双链（分子杂交）→基因诊断2）过程：制备探针并标记—分离靶DNA—变性处理--探针与靶DNA杂交—DNA或基因检测3）概念：基因探针（Probe）：是一段带有标记的，与待测基因有关的核酸序列。探针种类:基因组探针（genomicprobe）cDNA探针（cDNAprobe）寡核苷酸探针（oligonucleotideprobe）4）基因诊断方法（1）斑点杂交法又称等位基因特异的寡核苷酸(ASO)探针杂交。用人工合成的20个碱基左右长度的A

6、SO探针，一般要合成两种探针：正常探针，突变探针。将待测的细胞或DNA直接点在硝酸纤维膜或尼龙膜上，将标记有同位素（或其他标记）的变性探针与其进行杂交，通过放射自显影，判断受检基因的有无以及基因的拷贝数，进行基因诊断。ASO斑点杂交1986年，胡流清等基于点突变原理，用寡核苷酸探针进行基因诊断。正常探针突变探针PKU，AR（2）Southern印迹杂交(略）（Southernblottinghybridization)是经分子杂交检测DNA或基因突变的技术过程：切割——电泳——变性——转移——80度烘烤固定——杂交——放射自显影——观察。（参下图）（3）no

7、rthern印迹杂交（northernbloting)是RNA杂交的常用方法。原理：应用特异性基因探针分析基因的转录，转录量的变异，mRNA的大小。过程:提取总RNA…p193(4)western印迹杂交(westernbloting)是在蛋白质水平检测或研究基因表达与功能的方法。过程:提取蛋白质…p194(5)原位杂交（前述）2.聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）聚合酶链反应技术是在体外迅速的选择性扩增特定的靶DNA的方法。PCR的原理：（1）合成引物：按靶DNA片段的5`和3`端的碱基顺序各合成两条引物（长约20个碱基

8、的寡核苷酸）；（2）建立反应体系：将待测DNA变性后