肿瘤相关巨噬细胞过表达巯基氧化酶1对人SMMC-7721肝癌细胞功能影响的研究

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1、目录中文摘要.1英文摘要.3前言.6材料和方法.9结果.28讨论.38全文总结.44创新点.44潜在应用价值

2、.44参考文献.45附录.中英文缩略词对照表........52综述.53参考文献.62致谢.68攻读学位期间发表的学术论文及参会情况.70肿瘤相关巨噬细胞过表达巯基氧化酶1对人SMMC-7721肝癌细胞功能影响的研究硕士研究生论文肿瘤相关巨噬细胞过表达巯基氧化酶1对人S

3、MMC-7721肝癌细胞功能影响的研究摘要目的：肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是我国常见的恶性肿瘤之一，病死率高，研究肝癌相关的发病机制可以帮助提高临床诊疗效果，并能提升患者的生活质量。肿瘤微环境（tumormicroenvironment，TME）这个概念的提出为研究肿瘤的发病机制提供了新思路，近几年已成为了癌症研究的热点。本课题拟通过检测SMMC-7721肝癌细胞的细胞功能上的改变，明确巯基氧化酶1（Sulfhydryloxidase1，QSOX1）过表达对肝癌细胞功能的影响，探索肝癌微环境通过外分泌蛋白影响肝癌转移、复发的具体机制

4、。方法：通过载有QSOX1过表达基因的慢病毒感染人急性单核白血病细胞THP-1，筛选出稳定过表达QSOX1的THP-1细胞，将其作为过表达组（OE组）；同时，将空病毒转染的THP-1细胞作为阴性对照组（NC组）和未做任何处理的THP-1细胞作为空白对照组（BC组）。使用佛波酯（Phorbol12-myristate13-acetate，PMA）将THP-1细胞诱导成未分化巨噬细胞（undifferentiatedmacrophage，UM0），用无血清培养基培养UM0后，收集UM0的培养液，去除细胞后即为条件培养液。实时荧光定量PCR（Real-timefluoresce

5、ntquantitative-polymerasechainreaction，RT-PCR）和免疫印迹法（Westernblot）分别检测QSOX1的RNA相对表达量和蛋白表达量。用三组巨噬细胞的条件培养液分别培养SMMC-7721肝癌细胞后，CCK-8增殖实验检测肝癌细胞增殖能力的改变，克隆形成实验检测肝癌细胞的克隆形成能力，Transwell小室实验检测肝癌细胞的侵袭和转移能力，1肿瘤相关巨噬细胞过表达巯基氧化酶1对人SMMC-7721肝癌细胞功能影响的研究硕士研究生论文划痕实验检测条件培养基中的QSOX1对SMMC-7721肝癌细胞迁移功能的影响。用SPSS21.0

6、进行统计数据的分析。结果：RT-PCR结果显示QSOX1过表达基因成功在THP-1细胞中表达；WB检测发现QSOX1有QSOX1-S和QSOX1-L两种蛋白亚型，且OE组蛋白表达量明显高于阴性对照组和空白对照组。通过PMA成功将THP-1细胞诱导成巨噬细胞UM0。克隆形成实验发现，OE组肝癌细胞形成的克隆数平均为82.67±9.07个，高于BC组的48.33±7.50个和NC组的44.67±9.29个，差异有统计学意义（P<0.05）；细胞增殖实验显示，QSOX1过表达组肝癌细胞增殖能力在72h时间点开始高于其他两组（P<0.05），可促进肝癌细胞增殖；细胞划痕实验表明，

7、OE组在12h和24h肝癌细胞的迁移面积22均值分别为0.613±0.076mm和1.477±0.160mm，均明显高于其他两组在此时间点的迁移面积，差异有统计学意义（P<0.05）；Transwell转移实验中，OE组平均细胞转移数为157±16.66个，BC组为105±14.68个，NC组为116±11.98个，过表达组细胞转移数明显高于其它两组，差异有统计学意义（P<0.001）；Transwell侵袭实验，三组肝癌细胞的细胞侵袭数并未出现明显差别（P>0.05）。结论：肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞UM0可通过PMA诱