教育类职业教育毕业论文 hplc法测定乙肝清热解毒片中两种黄酮类成分的含量

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：教育类职业教育论文题目：HPLC法测定乙肝清热解毒片中两种黄酮类成分的含量指导老师：XXX二〇一一年十二月十日【摘要】　　目的建立以高效液相色谱（HPLC）法同时测定乙肝清热解毒片中两种黄酮类成分（槲皮素、山奈素）含量的方法。方法色谱柱为伊利特-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈—甲醇—0.2%磷酸（10∶45∶60），检测波长为370nm，流速为1.0ml/min，进样量为20μl，柱温为35℃。结果槲皮素、山奈素检测浓度的线性范围分别为4.2～25.2μ

2、g/ml（r=0.9994）、0.97～5.82μg/ml（r=0.9996）；平均回收率分别为97.56%，98.76%，RSD分别为1.62%，1.52%。结论本法快速、简便、准确、重现性好，可用于乙肝清热解毒片的质量控制。【关键词】乙肝清热解毒片色谱法高压液相槲皮素山奈素质量控制　　乙型肝炎病毒携带者，症见黄疸（或无黄疸）、发烧（或低烧）、舌质红、舌苔厚腻、脉弦滑数、口干苦或黏臭、厌油、胃肠不适等。乙肝清热解毒片是由虎杖、茵陈、北豆根、白花蛇舌草、甘草、拳参等制成，用于肝胆湿热型急、慢性病毒性乙型肝炎初期或活动期的治疗。其中白花蛇舌草为重要

3、组成成分，其活性成分黄酮类化合物有清热、解毒、活血、利尿的功效，可用于治疗各种癌症及炎症［1］。乙肝清热解毒片中黄酮类化合物的含量测定文献报道少见，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定乙肝清热解毒片中槲皮素、山奈素的含量，为评价乙肝清热解毒片的质量提供科学依据。　　1仪器与试药　　　　美国AgilentHP1100系列高效液相色谱仪（包括AgilentG1310A单元泵、AgilentG1316A柱温箱、AgilentG1314A可变波长检测器）；威马龙工作站；TDX高速离心机（美国Abbott公司）；电子精密天平(Ohaus)；KS150

4、0超声清洗器(宁波科胜仪器厂)。　　　　槲皮素、山奈素对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号：100081-200406，l10861-200304）；乙肝清热解毒片（山东海森药业有限公司，批号：20070201，20070501，20070604）；乙腈、甲醇为色谱纯；水为双蒸水；其他试剂为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱：伊利特-C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈—甲醇—0.2%磷酸（10∶45∶60）；检测波长：370nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；进样量：20μl。　　2.2对照品

5、溶液的制备　　精密称取经五氧化二磷干燥12h的槲皮素、山奈素对照品适量，加甲醇制成含槲皮素1.05mg/ml、山奈素0.2425mg/ml的混合对照品贮备液，备用。取混合对照品贮备液0.08ml于10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，即得对照品溶液。　　2.3供试品溶液的制备　　取乙肝清热解毒片20片，研细，精密称取粉末约5g，置烧瓶中，加入甲醇20ml和盐酸1ml，摇匀，置水浴中加热回流2h，迅速冷却到室温，滤过，滤液转移入25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，即可。　　2.4阴性样品溶液的制备　　取不含白花蛇舌草的空白片，按“

6、2.3”项下方法制备不含白花蛇舌草的阴性样品溶液。　　2.5专属性试验　　分别取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定。结果表明空白溶液色谱图在槲皮素、山奈素保留时间处未显示色谱峰，专属性良好。色谱见图1。　　2.6线性关系考察　　分别精密吸取对照品贮备液0.04、0.08、0.10、0.12、0.16、0.20、0.24ml于10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，制成系列对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，得槲皮素、山奈素的回归方程分别为A=62498C+4392（r=0.9

7、994）、A=67443C+3071.7（r=0.9996）。结果表明：槲皮素、山奈素检测浓度线性范围分别为4.2～25.2μg/ml和0.97～5.82μg/ml。　　2.7精密度试验　　取对照品溶液20μl，于室温下放置0、2、4、6、8、24h后进行测定，结果槲皮素、山奈素的RSD分别为0.69%、0.50%，表明日内精密度良好。取同一份对照品溶液于0、1、2、3、4天测定，结果槲皮素、山奈素的RSD分别为0.78%、0.62%，表明日间精密度良好。　　2.8稳定性试验　　取供试品溶液（批号：20070501）于0、2、4、6、8、24h进

8、行测定，结果槲皮素、山奈素的RSD分别为0.83%、1.10%，表明样品在24h内稳定。　　2.9加样回收率试验　　精密称取已知含量的样