聚肌胞对人早孕绒毛外滋养细胞tlr3表达的调节作用

《聚肌胞对人早孕绒毛外滋养细胞tlr3表达的调节作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、聚肌胞对人早孕绒毛外滋养细胞TLR3表达的调节作用作者：王菊1,钟刚2作者单位：1518106广东深圳，深圳市光明新区公明人民医院妇科2广东深圳，华中科技大学同济医学院附属同济医院【摘要】目的通过体外实验研究Toll样受体3(TLR3)在人早孕绒毛外滋养细胞株TEV-1的表达及聚肌胞PolyI:C对TLR3mRNA和蛋白的调节作用。方法体外培养TEV-1细胞;用不同时间及浓度聚肌胞刺激TEV-1细胞后RT-PCR和流式细胞仪检测其TLR3mRNA和蛋白的表达变化;免疫细胞化学SP染色法检测TLR3蛋白的定位表达。

2、结果(1)PolyI:C刺激可上调TEV-1细胞株TLR3mRNA的表达(P0.01)，且与刺激时间和剂量呈正相关。(2)PolyI:C刺激可上调TEV-1细胞株TLR3蛋白表达的平均荧光强度(P0.01);但荧光阳性细胞数刺激12h与刺激前比较差异无显著性(P0.05);刺激24h、48h的荧光阳性细胞数与刺激时间和剂量呈正关(24hP0.05;48hP0.01)。(3)免疫细胞化学显示TLR3主要定位于TEV-1细胞株的细胞浆。结论TEV-1细胞株TLR3的mRNA及蛋白的表达与Poly(I:C)刺激时间及剂

3、量呈正相关;TLR3主要定位于TEV-1细胞株的细胞浆，而细胞核及细胞膜没有观测到明显表达。提示人早孕绒毛外滋养细胞可能通过细胞浆的TLR3参与早孕母-胎界面的免疫反应。【关键词】TLR3;Poly(I:C);TEV-1细胞株;流式细胞仪;平均荧光强度;荧光阳性细胞数;免疫细胞化学[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheregulatoryeffectofPolyI:ContheexpressionofTLR3mRNAandproteininthehumanextravilloust

4、rophoblastcellline(TEV-1)，andwhethertheregulatoryeffectdependsonPolyI:Csdoseandtime.MethodsSemi-quantitativeRT-PCRanalysis，flowcytometryandimmuo-cytochemistrywereusedtodedectTLR3mRNAandproteinexpressionlevelandlocationinTEV-Icellline.Results(1)Theexpressionof

5、TLR3mRNAinTEV-IcelllinesignificantlyincreasedwiththePolyI:Csstimulationtimeanddoseincrease;comparetowithoutPolyI:Csstimulation(P0.01).ThemeanfluorescenceintensityoftheTLR3proteininTEV-IcelllineincreasedwiththePolyI:Csstimulationtimeanddoseincrease;comparetowi

6、thoutPolyI:Csstimulation(P0.01).(2)ThenumberoffluorescencepositivecelloftheTLR3proteinstimulated12hourhadnostatisticssignificance(P0.05);Butitsincreasedwiththestimulationtimeanddoseincreasein24and48hourintervention(24hP0.05;48hP0.01).(3)TheImmuocytochemistryr

7、esultrevealedthatTLR3proteinwasexpressedinTEV-Icelllinescytoplasma.However，itshardlytoseetheexpressioninthecellularmembraneandnucleus.ConclusionTLR3proteinwasexpressedinTEV-Icelllineandlocalizedtothecytoplasma.TheincreaseofmRNAandproteinexpressionofTLR3inTEV-

8、IcelllinedependsontheincreaseofthedoseandtimeforPolyI:Csstimulation.[Keywords]TLR3，PolyI:C;TEV-Icellline;flowcytometry;averagefluorescenceintensity;thenumberoffluorescencepositivecellloca