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1、二株棉花立枯病拮抗菌的筛选与鉴定杜志兵，杜秉海，姚良同，黄伟红，丁延芹通讯作者：Tel:86-538-8242908;E-mail:dingyq6885@163.com基金项目：山东省优秀中青年科研奖励基金（2006BS06012）作者简介：杜志兵(1980~),男,在读硕士，研究方向为分子微生物学E-mail:duzhibing331@163.com（山东农业大学生命科学学院，山东，泰安271018）摘要:从棉花根际分离了1277个细菌分离物，以棉花立枯病病原真菌立枯丝核菌（RhizoctoniasolaniKuhn）
2、为靶标菌，通过平板对峙法获得25个具有拮抗性能的分离物，其中MH1和MH25具有很强的拮抗性能，且拮抗性能稳定，具有较好的生防潜力。经过形态观察、生理生化特征分析及16SrDNA碱基序列测定和同源性分析，将MH1鉴定为短短芽孢杆菌（Brevibacillusbrevis），MH25鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。MH1和MH25的16SrDNA碱基序列已在GenBank中注册，登陆号分别为：EF488102，EF488103。关键词:棉花根际拮抗立枯病鉴定ISOLATIONANDIDENTIFIC
3、ATIONOFANTAGONISTICBACTERIAINHIBITINGAGAINSTPANTHOGENICFUNGIOFCOTTONRHIZOSPHEREDUZhi-bing,DINGYan-qin,YAOLiang-tong,HuangWei-hong,DUBing-hai(Departmentofmicrobiology,Collegeoflifescience,ShandongAgriculturalUniversity,Taian271018,China)Abstract:Twenty-fivestrains
4、ofantagonisticbacteria,screenedfrom1277isolatesofcottonrhizospere,haveinhibitioneffectagainstRhizoctoniasolabniKuhn.Basedontheresultsofmorphologiccharacteristics,physiologicalandbiochemicalpropertiesandphylogeneticanalysisof16SrDNA,MH1wasidentifiedasBrevibacillus
5、brevisandMH25wasidentifiedasBacillussubtilis.Thesequencesof16SrDNAobtainedinthisstudyhavebeenregisteredatGenBankdatabaseandtheaccessionnumber,respectively,areEF4488102andEF4488103.KeyWords:cottonrhizosphere,Rhizoctoniasolani,antagonistic,identification棉花立枯病是由立枯丝核
6、菌（RhizoctoniasolaniKuhn）引起的，是世界各产棉区分布广泛，危害严重的病害，我国主要棉区都有发生，其中以黄河流域为重，现在采用合理轮作、选用抗病品种[1]、施用化学农药等措施防治棉花立枯病的发生，但是轮作和筛选抗病品种周期长，使用化学农药不能从根本上防治棉花立枯病，又带来了环境污染。而生物防治的方法可以减少化学农药带来的环境污染，又解决了抗病棉种筛选周期长，抗病单一的缺点，是一种行之有效的方法；此方法既限制了有害微生物生长又增加了根际有益微生物的数量。近年来虽然有棉花立枯病原菌拮抗菌的相关报道[2,3
7、,4]，但是存在着拮抗菌难以在棉花根际长期定殖的问题。本实验从棉花根际分离并筛选的拮抗菌有利于其在棉花根际的定殖。拮抗菌的应用还可以有效的促进植物的生长。本实验从高河周大庙、马集新庄、鸡黍李固堆、济宁、金乡、济宁农科院的农田中采集棉花根际土，筛选棉花立枯病的拮抗细菌，获得具有很好生防应用潜力的拮抗菌株2株，其中MH1被鉴定为短短芽孢杆菌（Brevibacillusbrevis），MH25被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。1材料和方法1.1材料供试病原菌棉花立枯病原菌-----立枯丝核菌（Rhizo
8、ctoniasolaniKuhn）由本实验室保存。培养基马铃薯蔗糖培养基（PDA），牛肉膏蛋白胨培养基（NA），高氏一号培养基，LB培养基。试剂分子生物学试剂购于宝生物工程（大连）有限公司，DNA小量快速纯化试剂盒（3SSpinAgaroseGelDNApurificationkit）购于上海申能博彩生物科技有限公司
