8.人参、藜芦合用对大鼠肝p450酶活性及mrna表达的调控作用040930

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1、第6页共6页KSBIO-NO.0404《中国中药杂志》367页人參、藜蘆合用對大鼠肝P450酶活性及mRNA表達的調控作用王宇光，高月*，柴彪新，陈鹏，谭洪玲，赵永红，肖成荣，孙圆媛，朱力军(军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室，北京100850)[摘要]目的：研究中药十八反中人参与藜芦合用对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法：采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450与细胞色素b5含量及氨基比林N-脱甲基酶(APND)、对硝基苯酚羟化酶(pNPH)活性。采用RT-PCR技术检测大

2、鼠肝中5种P450同工酶CYPlAl，CYP2B1/2,CYP2C11，CYP2El及CYP3A1mRNA的表达。结果：人参与藜芦合用可明显降低P450蛋白含量，可降低细胞色素b5的含量，单药及其与藜芦配伍都能使APND活性下降。在mRNA水平上，藜芦可诱导CYP2C11的基因表达，与人参合用后却使得CYP2C11的表达下降。藜芦与人参配伍诱导了CYPlAl的表达。人参可抑制CYP2B1/2的基因表达，与藜芦合用后却明显诱导了CYP2B1/2的表达，人参与藜芦合用后也明显诱导了CYP3A1的表达。结论：人参与藜芦

3、配伍前后对一些CYP亚型调控作用发生明显变化，可能存在基于药物代谢酶机理的相反作用，需进一步结合代谢研究加以综合分析，阐明相反作用的机理。[关键词]十八反；细胞色素P450；逆转录聚合酶链式反应；药物相互作用[中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1001-5302(2004)04—0366-05细胞色素P450(cytochromeP450)氧化酶系统是对许多内源性和外源性物质进行I相氧化代谢的主要酶类[1]，其主要位于肝脏中。许多外源性物质包括治疗药物、环境化合物及一些天然产物都能对细胞色素P4

4、50酶系统产生诱导或抑制效应，这种对于细胞色素P450催化的氧化反应的调控作用可以改变许多化合物的药理或毒理活性[2]。中药十八反是中药药性理论的重要组成部分，是中药七情“相反”这一配伍的具体体现[3]。人参与藜芦属中药十八反中相反药对，属中药配伍禁忌。反的作用主要是指两种中药配伍应用产生毒性或使药效降低。近年来研究发现，很多中草药如葛根[4]、栀子[5]、甘草[6]、黄芩[7]等及其单体化合物黄芩苷、栀子苷、甘草甜素都对P450酶有调控作用，说明中药对P450酶作用是一种客观存在。研究人参与藜芦配伍应用对主要的

5、药物代谢相关的CYP同工酶的酶活性及mRNA表达的影响，为进一步探讨十八反作用的机理及可能产生的药物相互作用提供实验依据。1材料与方法1.1药品与试剂人参购自北京同仁堂中药厂，藜芦购自河北安国中药材市场，均经本所马百平教授鉴定分别为五加科植物人参PanaxgingsengCAMey.的干燥根；百合科植物黑藜芦VeratrumnigrumL.的干燥根。人参称重后加入10倍量水，浸泡90min后煎煮3次，每次1h，提取液合并，旋转蒸发浓缩药物浓度为100g·L-1；藜芦水煎液制备同上，药物浓度为10g·L-l；人参-

6、藜芦混合煎液按《中国药典》I部规定的临床剂量比例称重混合，制备方法同上，药物浓度为100g·L-1。Folin酚试剂为sigma公司产品；氨基比林(aminopyrine)为北京化学试剂公司产品；对硝基苯酚(p-nitropheno1)为北京理工大学宏宇化工公司产品；RNA提取试剂盒(RNAgentsTotalRANisolationsystem)为promega公司产品；逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptase-polymerasechainreaction，RT-PCR)试剂盒，DL第6页

7、共6页2000DNAMarker为takara公司产品。CYPlAl，CYP2B1/2，CYP2C11，CYP2C11andCYP3A1及内参照亲环蛋白(cyclophilinCYC)的引物由北京赛百盛基因技术有限公司合成。其他无机及有机试剂均为分析纯。1.2动物分组及给药Wistar大鼠，体重180~230g，♀♂各半，由军事医学科学院实验动物中心提供。随机分为空白组、藜芦组(0.075g·kg-1)、人参组(0.75g·kg-1)、人参藜芦组(0.83g·kg-1)，每组8只，其中空白组用生理盐水，各药物组给

8、予规定剂量，连续灌胃给药7d后处死动物，取肝脏制备微粒体和RNA。1.3肝微粒体的制备大鼠脱臼处死，打开腹腔和胸腔，剪开心脏用注射器吸生理盐水以门静脉灌洗至肝脏颜色变为土黄色。采用钙沉淀法制备微粒体，肝脏按1：4(W/V)比例加入TMS缓冲液匀浆后于4℃，10360r·min-1，离心20min，取上清液与85mmol·L-1CaCl2混匀冰浴5min，4℃，15540r