藜芦人参配伍对大鼠肝功能及肝组织蛋白质表达的影响.pdf

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1、·982·中国药理学与毒理学杂志2013年12月第27卷第6期ChinJPharmacolToxicol，Vol27，No6，Dec2013藜芦人参配伍对大鼠肝功能及肝组织蛋白质表达的影响孙爱华，王宇光，孟浩，吕永壮’，高月，姜颖’(1．军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室，北京102206；2．军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室，北京100850)摘要：目的利用差异蛋白质组技术，探讨藜芦人参配伍对肝功能及蛋白质表达的影响。方法大鼠雌雄各半，ig给予藜芦O．27g·kg～、藜芦O．09

2、g·kg+人参0．24g·kg一、藜芦0．27g·kg+人参0。71g·kg～、藜芦0．81g·kg。‘+人参2．13g·kg。。，每天1次，连续8周。收集血清及肝组织。采用全自动生化仪测定谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)的水平，并对肝组织进行常规HE染色观察组织病理变化。通过差异凝胶电泳技术(DIGE)分离大鼠肝组织总蛋白，基质辅助激光解吸电离时间飞行串联质谱及数据库查询鉴定差异表达蛋白质。结果血生化指标检测结果表明，只有藜芦0．81g·kg+人参2．13g·kg检测到GOT没有升高的趋势；而GPT明显升高(P<0．05)。病理

3、学结果显示，正常对照、藜芦0．27g·kg～、藜芦0．09g·kg+人参0．24g·kg及藜芦0．27g·kg+人参0．71g。kg组大鼠肝组织无明显病理变化；藜芦O．81g·kg。‘+人参2．13g·kg有2例(8．7％)样本分别出现肝窦扩张淤血及淋巴细胞浸润的病理改变。藜芦人参合用前后大鼠肝组织差异蛋白质经DIGE进行分离后，成功获得了分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱；经DeCyder6．5软件分析获得差异>1．5倍的蛋白质点共3O个；质谱鉴定去冗余后得到4种差异蛋白质，其中二硫键异构酶A3前体和碳酸酐酶III明显降低；谷氨酸脱氢酶

4、1及氨甲酰磷酸合成酶1明显升高。结论藜芦O．81g·kg和人参2．13g·kg。‘合用可能影响大鼠肝内与pH自稳、蛋白折叠及氨基酸代谢相关酶的表达。关键词：藜芦；人参；肝；串联质谱法；蛋白质组中图分类号：R972，R966文献标志码：A文章编号：1000-3002(2013)06_()982-()6DOl：10．3867／j．issn．1000-3002．2013．06．011藜芦味辛、苦，性寒，有涌吐风痰和杀虫疗疮的的筛选和鉴定，分析藜芦人参配伍对肝组织蛋白质表功效，主要用于治疗高血压、中风和癫痫等疾病。藜达的影响。芦与人参配伍有增毒减效

5、作用』。肝是药物代谢的场所，也是药物不良反应的主要靶器官。为了考1材料与方法察藜芦人参配伍对肝组织蛋白质表达的影响，本研究根据前期均匀设计的藜芦人参配伍毒性研究结1．1试剂和仪器‘果汪』，以藜芦人参配伍(1：2．63)的8周重复给药大Cydye试剂盒、IPG胶条(pH3一lo)和IPG缓冲鼠模型的肝为样本，使用差异凝胶电泳(diference液(pH3～10)，购自美国GE公司。硫脲，购自美国gelelectr0phoresis，DIGE)技术，通过差异蛋白质Fluka公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酞胺、甘氨酸、三轻甲基氨基甲烷(Tris)、十

6、二烷基硫酸钠(SDS)、尿素、基金项目：国家重点基础研究发展计划(973计划)CHAPS、二硫苏糖醇([)_)、考马斯亮蓝G-250和(2011CB505300)；国家重点基础研究发展计划(973计Bradford蛋白质定量试剂盒，购自美国Bio-Rad公划)(2011C13505304)；国家自然科学基金(81001470)司；乙腈(ACN，色谱纯)和三氟乙酸(TEA)，购自美国作者简介：孙爱华，女，博士，副研究员，主要从事肝蛋Merck公司；蛋白酶抑制剂cocktail，购自美国Roche白质组学和中药现代化研究，Tel：(010)80

7、727777-1140，公司；胰酶(测序级)，购自美国Promega公司；DMF，E-mail：sunah620@126．com；姜颖，女，研究员，主要从购自美国Sigma公司；赖氨酸，购自美国Amresco公事肝蛋白质组研究；高月，女，研究员，主要从事中药药理司；预染蛋白标准(6～175ku)，购自美国NEB公司；毒理研究。通讯作者：姜颖，E·mail：jiangying304@hotmail．com，谷草转氨酶(glutamicoxaloacetictransaminase，TeI：(010)80705299；高月，Tel：(010)6

8、6931312，Fax：GOT)、谷丙转氨酶(glutamicpyruvictransaminase，(010)66931312，E—mail：gaoyue@nic．bmi．ac