生化实验考试复习内容

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1、生化实验习题1简述蛋白质的几种定量方法及其各依据的原理。2简述透析的原理，影响透析的因素及透析的应用。透析是一种利用小分子能通过，大分子不能通过半透膜的原理把它们分开的一种重要手段。影响透析的因素主要有膜、溶剂（水溶液、大分子溶液）、物理条件（温度、压力）、董南膜平衡等。透析主要用于将大分子物质和小分子物质分开，如蛋白质的分离纯化。3请设计一项实验，分离并鉴定某一微生物中的游离氨基酸。利用纸层析法分离鉴定该微生物中的游离氨基酸。实验所需器材包括层析缸、毛细管、喷雾器、培养皿和层析滤纸，实验所需试剂包括扩展剂、氨基酸溶液（各标准氨基酸溶液和待测氨基酸溶液）和显色液（0.1%水合茚

2、三酮正丁醇溶液）。实验操作步骤如下一取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘1.5-2cm处用铅笔划一条直线，在此直线上以相同间距作出记号。二点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在所作记号的位置上，待干燥后，可重复点3次。三扩展用线将滤纸缝成筒状，将滤纸直立于盛有扩展剂的培养皿中扩展。待溶剂上升至距滤纸上端边缘1cm时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界限，自然干燥或吹风机热风吹干。四显色用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液，用热风吹干显出层析斑点。五计算各氨基酸Rf值。滤纸上的层析斑点图即是对氨基酸分离的结果，通过比较各标准氨基酸Rf值和待测氨基酸的Rf值即可鉴别待测的游离氨基酸。4纸层

3、析分离氨基酸的原理是什么？5层析技术包括哪几类？请简要介绍凝胶层析的原理。层析技术包括吸附层析、离子交换层析、分配层析、薄层层析、凝胶层析和亲和层析。凝胶层析的基本原理是用一般的柱层析方法使相对分子质量不同的溶质通过具有分子筛性质的固定相（凝胶），从而使物质分离。固定相是凝胶，各组分分子的大小不同，而在凝胶上受阻的程度不同，从而分层。大分子物质沿凝胶颗粒间隙随洗脱液移动，移动速度快，先被洗出层析柱；小分子物质可通过凝胶网孔进入颗粒内部，然后再扩散出来，流程长，移动速度慢，最后被洗出层析柱。6简述测定氨基酸含量的原理及注意事项。甲醛滴定法注意事项：1标准NaOH溶液应在使用前标定

4、，并在密封瓶中保存，不可使用隔日贮存在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。2中性甲醛应在临用前配制，若已放置一段时间，使用前应重新中和。3本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓度要严格标定，加量要准确，全部操作案分析化学要求进行。1常规的分离蛋白质的方法有哪些，各有什么优缺点？2简简述测定氨基酸含量的原理及注意事项。甲醛滴定法注意事项：1标准NaOH溶液应在使用前标定，并在密封瓶中保存，不可使用隔日贮存在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。2中性甲醛应在临用前配制，若已放置一段时间，使用前应重新中和。3本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓度要严格标定，加量要准确，全部操作案分析化学要求进行。

5、3核酸的检测方法有哪些？并简述各个方法的原理。一定磷法RNA和DNA中都含有磷酸，根据元素分析获知RNA的平均含磷量为9.4%，DNA的平均含磷量为9.9%。因此，可从样品中测得样品中的含磷量来计算RNA或DNA的含量。用强酸将核酸样品消化，使核酸分子中的有机酸转变为无机酸，无机酸与钼酸生成磷钼酸，磷钼酸在还原剂作用下生成钼蓝。可用比色法测定样品中的含磷量。二定糖法RNA含有核糖，DNA含有脱氧核糖，根据这两种糖的颜色反应可对RNA和DNA进行定性和定量测定。RNA分子中的核糖与浓盐酸或浓硫酸作用脱水生成糠醛，糠醛与某些酚类化合物缩合而生成有色化合物。如糠醛与3,5-二羟甲苯反

6、应生成深绿色化合物，反应产物在660nm有最大吸收，并且与RNA的浓度成正比。DNA分子中的脱氧核糖和浓硫酸作用，脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，与二苯胺反应生成蓝色化合物。反应产物在595nm有最大吸收，并且与DNA的浓度成正比。三紫外吸收法核酸组分嘌呤环、嘧啶环具有紫外吸收的特性。用这种方法在测定核酸含量时，通常规定在260nm，测得样品RNA或DNA溶液的A260值，即可计算出样品中核算含量。4请列举出2种以上将蛋白质和小分子物质分开的方法，并对其原理进行简要说明。一透析法透析法是利用蛋白质大分子对半透膜的不可透过性而与其他小分子物质分开。二超滤法其原理是利用超滤膜在一定

7、的压力或离心力的作用下，大分子物质被截留而小分子物质则过滤排出。三分子排阻层析其原理是利用蛋白质分子量的差异，通过具有分子筛性质的凝胶而被分离。四密度梯度离心蛋白质颗粒的沉降速度取决于它的大小和密度。当其在具有密度梯度的介质中离心时，质量和密度大的颗粒比质量和密度小的颗粒沉降得快，并且每种蛋白质颗粒沉降到与自身密度相等的介质梯度时，即停滞不前，可分步收集进行分析。5如何分析未知样品的氨基酸成分？1如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定？2纸层析、柱层析和薄层层析各有什么特点？纸层析是一种