棉花bt蛋白检测方法的研究

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1、棉花BT蛋白检测方法的研究1、相关定义1.1、共振光散射基本概念和技术特点光散射是电磁辐射与物质间相互作用的一种表现形式。瑞利散射(Rayleighscattering,RS)是一种散射波长等于入射波长的弹性散射,是尺度远小于入射光波长的粒子所产生的散射现象。其散射强度受入射光波长、溶液折射率的波动值、溶液浓度以及散射粒子的大小等因素影响[7]。共振光散射(Resonancelightscattering,RLS)是指当瑞利散射接近或位于分子吸收带附近时,电子吸收光频率与散射频率相同时,电子会发生共振而吸收能量并产生

2、再次散射,这一过程称为共振瑞利散射[8-10]。其散射强度比单纯的瑞利散射提高几个数量级[11]。由于RLS信号强度不再与λ4成正比,其散射光谱特征与吸收光谱有关,不同吸收光谱的分子会出现彼此不同的RLS光谱特征和相应的RLS峰,因此RLS法较单一的RS具有更好的选择性;研究发现,RLS法对于大分子非键作用非常敏感[12],有利于对生物大分子的反应过程的研究、表征以及测定;与此同时,RLS强度和光谱特征受到离子缔合反应的影响,离子缔合反应是通过疏水作用、静电作用等作用完成的[13]。因此,RLS技术被用在痕量的药物、

3、金属、非金属、有机化合物和生物大分子等方面的测定。共振光散射技术在应用过程中的优势日渐突出[14],主要表现在:-2-(l)仪器基本结构简单,功能一目了然,易于操作和检测。选择合适的激发和发射通带宽度,令△λ=0,则RLS光谱可通过普通的荧光分光光度计上获得[15]。仪器光源使用高亮LED替代即可,有利于该技术的推广使用和普及;(2)灵敏度高。用于微量分析灵敏度可达10-9g;(3)拓宽了探针的范围:该技术可适用于一些无荧光的探针、无颜色变化的有机及无机试剂探针,与分光光度法和荧光分析法相比,应用范围更宽[16]。凡

4、是有利必有弊,RLS分析技术也存在缺陷,主要表现在一下几个方面:(1)本体溶液信号难以提取,选择性差:由于被分析物和共存干扰物质的信号难以区分,因此测量结果的准确性受到影响;(2)干扰成分多,抗干扰能力及重现性差:动态光散射、Dyndall散射和荧光等成分通常都包含在所测得的RLS信号中,并且散射信号强度受共存物、折光指数、离子强度、温度、介质极性、溶液的pH和入射光强度等多种因素影响,并且易受外来因素干扰[17]。(3)油溶性试剂使用不便:目前该技术在油溶性试剂中使用不便,研究和应用主要集中于水溶液中,这将会在生物

5、体中具有互不相溶性的主、客体之间的相互识别方面的研究遭遇限制和瓶颈[18][19]。1.2、热激蛋白的定义热激蛋白(HSP)是细胞在一些诸如热休克、水分亏缺、重金属污染等胁迫条件下高效表达的一大类蛋白。根据对昆虫、鸟类、鱼类、哺乳类、植物以及细菌、酵母等多种生物的研究发现,热应激是生物体遭受胁迫时正常蛋白的合成受阻,HSP合成的一系列过程[4]。1.3、蛋白质的定义蛋白质是一种复杂的有机化合物,是生物体最重要的组成成分之一。通常认为蛋白质是α氨基酸通过酰胺键连接而成的长链分子,这一分子的长链也被称为肽链。但是这样定义

6、蛋白质分子还有若干不严密之处。第一,在自然界存在着许多种氨基酸,如ω氨基已酸,它可以作为单体,也可以通过形成分子间的酰胺键而成为长链分子,即我们日常生活中的尼龙6。但是尼龙6不可能具有蛋白质的空间结构,更没有蛋白质的生物活性。第二,一些酸性或碱性的氨基酸,除了α氨基和α羧基可形成酰胺键外,氨基酸残基侧链上的集团也能形成酰胺键。应该认为,由mRNA转译而成的新生肽链还不能说是蛋白质。转译所得的新生肽链只有经历一系列转译后的事件才能成为具有特定空间结构、呈现明确生物功能的蛋白质。因此,对于蛋白质的一个比较严格的定义应该是

7、:一种由DNA编码的L型α氨基酸通过α碳原子上的氨基和羧基间形成酰胺键,连接而成肽链,经转译后加工形成的具有特定空间构象和生物功能的生物大分子。当然,有相当多的蛋白质种除了氨基酸外,还有一些其他的组分,如糖类、脂类、金属和有机1.4、BT模式的定义追溯有关BT模式的涵义,最早是菲律宾于1990年在6957号法令里的定义。并且在1993年时,在7718号法令中,对BT模式的定义修订为”根据合同安排,由项目发起者承担拟定的某项基础设施或发展设施的筹资和建设,待项目建设完工以后即将该项目转给政府机构或有关政府单位,后者则向

8、项目发起人支付该项目的总投资,并加上某一合理比率的回报额《176]。1996年联合国工业发展组织也在《基础设施BOT项目指南》将BT定义为BOT的一种变体,即”建成后立即移交(buildtransferimmediately)”②「人在国内,也有很多学者在论文或著作中对BT模式进行定义-葛培健,张燎在《基础设施BT项目运作与实务》一书中定义BT