滨梅茎段组培污染率控制方法的研究

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1、滨梅茎段组培污染率控制方法的研究*基金项目:中国博士后科学基金面上资助项目（2012M511728）；连云港市科技攻关项目（CG1143）第一作者简介:燕志(1989-)，男，江苏沛县人，学士，主要从事植物组织培养研究。通讯作者:张焕仕（1978-），男，山东诸城人，博士。现主要从事土壤生态学和天然产物研究开发。Email：zhanghuanshi@126.com。燕志1，张焕仕1.2，王猛1，张浩1，钦佩2（1.南京大学连云港高新技术研究院，江苏连云港，222000；2.南京大学盐生植物实验室，江苏南京，210093）摘要：以当年生滨梅茎段为试材，针对在组

2、培过程中滨梅茎段易感染外生菌和内生菌的问题进行了污染率控制方法的探索。研究结果表明：（1）不同的消毒试剂中，0.1%的升汞消毒效果最好；（2）不同消毒试剂最优组合为75%的酒精+0.1%的升汞，可以有效控制外生菌染菌率在8.25%，死亡率在18.20%；（3）最优消毒试剂组合的最佳消毒时间为先用75%酒精消毒30秒，再用0.1%的升汞消毒5分钟；（4）抗生素添加试验中，添加浓度为5‰的制霉菌素可使内生菌染菌率减少到3.2%，死亡率减少到9.2%，无菌苗获得率为81.3%。关键词：滨梅；组织培养；外生菌；内生菌中图分类号：Q93-334文献标识码：AStudi

3、esonContaminationControlforStemSegmentCultureintissuecultureofPrunusmaritimaYANzhi1,ZHANGhuan-shi1,2,WANGmeng1,ZHANGhao1,QINpei2(1.ResearchInstituteofNanjingUniversityinLianyungang，Lianyungang222000;2.HalophyteResearchLabofNanjingUniversity，Nanjing210093)Abstract：Intheprocessofcult

4、ivation,PrunusmaritimaMarshallmayappearinfectbacteriaandendophytes.Theone-yearoldstemsegmentsofPrunusmaritimawastakenasmaterialtoexplorethemethodofcontaminationcontrol.Theresultsshowedthat:(1)Inthedifferentdisinfectionreagent,thedisinfectioneffectof0.1%HgCl2wasthebestofall.(2)Thebe

5、stcombinationofdifferentdisinfectionreagentswere0.1%HgCl2and75%alcohol,whichcould8effectivelycontroltheinfectionrateofbacteriain8.25%andmortalityratein18.20%.(3)Thebestdisinfectiontimeofthebestdisinfectionreagentcombinationwas75%alcoholfor30seconds,andthen0.1%HgCl2for5minutes.(4)In

6、theantibiotictest,afteradding5‰nystatindihydrate,thecontaminationrateofendophytescanbefurtherreducedto3.2%,themortalityratereducedto9.2%andtheasepticseedlingratewas81.3%.Keywords:Prunusmaritima;tissueculture;passengerbacteria;endophytes滨梅(Prunusmaritima)是蔷薇科樱桃属的一种沙生灌木果树，原产于美国大西洋沿岸，

7、从纽芬兰到北卡罗来纳州均有分布[1]。滨梅春季可以开出白色花朵，有着很高的观赏意义。除此之外，滨梅果实味道酸甜可口，叶片可以用来提取绿色染料[2]，种子可以提取植物油等，在盐渍土壤地区具有很高的经济价值[3]。滨梅具有抗干旱、耐盐碱的特性，可以适应海滨的恶劣条件，在海滨滩涂的生态修复与水土保持上有着非常重要的作用，目前在中国的引种和栽培已获得成功[2]。然而滨梅的引种成活率低，采用种子和扦插等方式进行繁殖又极为困难，因此组织培养成为其种苗繁殖的重要途径[4]。然而植物组织培养过程中仍然存在不少问题，其中染菌、褐化、玻璃化被认为是组织培养的三大杀手，滨梅组培亦

8、存在同样的困扰。目前滨梅的组织培养多采用种胚作为外植