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1、欧美杨107茎尖脱毒及组培快繁研究欧美杨107（populus×euramericanacv.“Neva”）是中国林科院张绮文研究员于1984年从意大利引入我国的杨树新品种,该品种具有树形美、干形直、尖削度小、树冠窄小、病虫危害少、生长迅速等优点,已经成为了我国北方地区广泛栽培的杨树优良品种之一。近年来,由于欧美杨107长期采用无性繁殖方式繁殖苗木,导致许多真菌、细菌及病毒的出现,使得欧美杨107种性慢慢退化,植株抗逆性,速生性明显降低。为恢复欧美杨107优良种性,并对其品种进行苗木复壮。本研究便采用欧美杨10
2、7大田茎段、茎尖、叶片、根及其瓶苗茎段、顶芽、瓶苗叶片为实验材料,进行脱毒实验及其检测比较。还采用选育出的2株欧美杨107优良单株进行组培扩繁等。以期建立一套操作简单、快速高效且效果稳定完善的脱毒快繁技术体系,旨在恢复欧美杨107良种种性,为杨树良种的长期推广具有积极的指导意义。主要结论如下:1、采用带有顶芽或腋芽的两株优良单株的大田茎段为外植体材料,切取长1cm且每段带有一个顶芽或腋芽的茎段,接于诱导分化培养基培养,最后得到大量优良单株组培苗。2、取经组织快繁培养得到的优良单株瓶苗茎段进行分化增殖正交实验,筛
3、选最适宜的分化增殖配方。结果为1/2MS+6-BA0.45mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA1.0mg·L-1的培养基分化增殖效果最好,最高增殖数达26。3、用优良单株继代增值的不定芽,接种于生根培养基,筛选最适合的生根配方,实验表明,生根效果最理想的培养基为1/2MS+NAA0.02mg·L-1+IBA0.05mg·L-1,生根率100%,平均生根数5.9条。4、欧美杨107茎尖脱毒培养,
4、成功获得4个脱毒株系。通过采用（ELISA）检测技术对4个株系进行检测,结果显示,茎尖培养得到的4个株系中杨树烟草脆裂病毒（TRV）完全脱除,被检测脱毒株系OD值均小于病毒临界值（CUTOFF）0.2395;而被测4个株系中杨树花叶病毒（PV-1）未完全脱除,其中一个株系被检测OD值大于病毒临界值（CUTOFF）0.2175。5、为更好脱去欧美杨107的病毒,对欧美杨107采用变温热处理结合茎尖脱毒,热处理过程中瓶苗生长迅速,同时伴有叶变黄,皱缩、落地现象发生,瓶苗耐受时间最长为24d,热处理结束后被剥离的茎尖
5、生长快,褐化现象明显减少甚至没有,保存率比较高。将热处理培养成的幼苗进行检测,结果表明,杨树烟草脆裂病毒（TRV）和杨树花叶病毒（PV-1）两种病毒在被检测植株体内都不存在,被检测植株OD值均小于两种病毒临界值,说明热处理与茎尖结合能够有效同时脱除TRV和PV-1两种病毒。6、欧美杨107化学结合茎尖处理脱毒,检测结果说明,当添加病毒唑15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1时能够同时将TRV和PV-1两种病毒脱除,添加这三种浓度被检
6、测植株的OD值均小于两种病毒的临界值;而低于15mg·L-1时两种病毒均不能脱出。但在实验过程中15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1病毒唑处理对试管苗生长均有抑制作用,浓度越高抑制作用越强,15mg·L-1继代多次后,抑制作用减轻或降为零,瓶苗保存率比较高,而20mg·L-1、25mg·L-1病毒唑有时严重抑制瓶苗的生长,保存率极低,所以15m
7、g·L-1在欧美杨107化学处理中为首选浓度,脱毒处理效果也比较理想。
