甘薯济黑1号茎尖脱毒和快繁技术探究

《甘薯济黑1号茎尖脱毒和快繁技术探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、甘薯济黑1号茎尖脱毒和快繁技术探究　　摘要：以甘薯（IpomoeabatatasL.）济黑1号为试材，对济黑1号茎尖脱毒和脱毒苗快繁技术进行研究，并用指示植物法对再生植株无性系进行病毒检测。结果表明，在薯块出芽30d内，外植体的处理中采用2%的NaClO溶液处理最好，接种于含有1mg/L6-BA的MS培养基中，取材污染率最低，成苗率最高。快繁过程中普通MS培养基中加入0.02mg/LIAA对快繁更加有利。关键词：甘薯（IpomoeabatatasL.）；脱毒；茎尖；快繁中图分类号：S531文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）23-5887-02甘薯（Ipomoea

2、batatasL.）为无性繁殖作物，是我国四大粮食作物之一。甘薯体内病毒的积累可造成品种种性退化，品质和产量降低，同时导致甘薯商品率明显降低，对甘薯生产造成严重危害。国内外迄今尚未育出高抗病毒病的实用甘薯品种，也无防治病毒病的高效农药。目前利用茎尖分生组织培养脱毒甘薯已成为防治病毒病，提高甘薯产量和品质的首选方法。茎尖分生组织培养要求技术性强，难度较大，再生植株的成苗受甘薯品种、培养基与激素等多种因素的影响，导致成苗率普遍比较低[1]。5本研究以目前紫薯加工领域中需求越来越大的紫甘薯济黑1号为试材，探索影响甘薯济黑1号茎尖分生组织培养和试管苗快繁的有关因素，为工厂化快速繁育甘薯脱毒

3、苗提供依据。1材料与方法1.1试验材料济黑1号由武汉市农业科学研究所提供，种植于湖北省农业科学院粮食作物研究所甘薯育苗圃；常规药品与试剂均购自北京国药试剂厂。1.2试验方法取薯块上萌发的芽苗作为外植体材料，将2～3cm左右的外植体放入小培养皿中，加入洗洁精反复冲洗，然后用自来水冲洗直至无洗洁精残留。将培养皿放在超净工作台内，加70%乙醇处理30s，灭菌水反复冲洗2次以上，2%NaClO溶液消毒5min，灭菌水反复冲洗3次后至无残留，备用[4]。将灭菌后的材料在解剖镜下取带有1～2个叶原基的茎尖分生组织，分别接种于MS基本培养基+1mg/L6-BA的诱导再生培养基，植株再生后，分别移

4、植到普通培养基（MS基本培养基+30g/L蔗糖+9g/L琼脂、pH5.8）和再生培养基（MS基本培养基+0.02mg/LIAA+30g/L蔗糖+9g/L琼脂、pH5.8）进行快繁。培养条件为：温度（28±2）℃，光照度2000～3000lx，光照时间12～165h/d，空气湿度控制在50%以下。1.3甘薯脱毒苗的检测1.3.1目测法根据甘薯叶片和薯块上出现的典型症状判断甘薯是否带毒。甘薯叶片上病毒病的症状主要包括：叶片斑点型、花叶型、卷叶型、皱缩型、黄化型；薯块上的症状主要是产生黑褐色或黄褐色龟裂纹。根据外观症状作初步判断，有以上症状表现的植株和薯块就不能作为接种材料，但是有些潜隐

5、性病毒侵染植物后并不表现明显的症状，此方法作为一种辅助手段进行初步判断[2]。1.3.2指示植物法随着分子生物学的发展，cDNA探针和双链RNA技术已经应用于多种植物的病毒检测。但目前因难以设计构建引物，故此仍采用廉价可靠的指示植物法（常用巴西牵牛作为指示植物）。本试验采用的是巴西牵牛，其对多种侵染甘薯的病毒敏感，受侵染部位易产生系统症状[3]。2结果与分析2.1不同消毒处理时间对甘薯成苗率的影响外植体消毒对组织培养至关重要，甘薯的外植体消毒选择2%的NaClO溶液处理5min。在茎生长周期未超过1个月时取材最好，随着周期的延长污染苗数增加，在污染苗数增加后，延长NaClO溶液消毒

6、时间至7～10min，试验结果见表1。由表1可以看出，2%的NaClO溶液处理55min时消毒效果最好，取材时间也应控制在30d内，每10d记录一次，成苗率分别达到89%、84%和87%；随着NaClO溶液消毒时间的延长，污染苗数逐渐降低，但成苗数也随之降低，消毒时间延长对甘薯茎尖有所伤害。2.2不同培养基对甘薯再生与扩繁的影响将济黑1号茎尖分生组织接种于含有1mg/L6-BA的MS培养基中，约10d后茎尖分生组织开始膨大并转绿；培养20d左右茎尖形成2～3mm的小芽点，肉眼可见小叶尖，茎尖基部同时形成黄绿色的愈伤组织；随着培养时间的延长，茎尖伸长基部形成不定根，40d茎尖长成小苗

7、，基部有少量愈伤组织（图1）。从表2可以看出，在两种培养基上甘薯脱毒试管苗的生长均良好，在不添加激素的MS培养基中济黑1号脱毒试管苗的平均增殖倍数为3.3倍，在添加0.02mg/LIAA的MS培养基中，济黑1号脱毒试管苗的增殖倍数为4.0，表明适当添加IAA可以提高繁殖率。2.3甘薯脱毒效果的检测茎尖越小脱除病毒的效果越好，但茎尖越小诱导存活的难度就越大。特别是从田间或温室采回的材料带菌较多，培养时要经过NaClO溶液的浸泡，75%的乙醇严格灭菌，对幼嫩生长点影响较大