资源描述：
《银杏茎段的组织培养研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、银杏茎段的组织培养研究利用银杏细胞的大圮培养来工业化生产银杏次生物质代谢产物,是一条比较可行、又节省土地、实现集约化经营的一条途径。而细胞培养的第一步需要稳定的叶源，利用茎段培养可以为愈伤组织的建立提供源源不断的叶片來源。建立稳定的叶源，一方面是获得较多的叶片数址，另一方面是获得较大的叶而积。本'-以次得大址叶片或叶片具有较大的叶面积为目标,研究了茎段培养的位1IIW仃顶芽的上段、帯仃腋芽的中段、带仃了叶的卜•段.在培养过程中器官发生存在较人差异),及芽分化情况。利用激素和添加稀土对叶片的诱导、叶片数目、叶而积等指标进行调
2、控。鉴于顶芽和腋芽在培养模式和分化条件的不同.以5个优良银杏品种胚培养的1个月龄的无菌苗各部分器官为材料,测定不同品种间幼苗各段的激素含fit分析银杏茎段快緊中位置效皿的原因，为解决银杏组培中的技术问题提供理论参占依肚1材料与方法1.1材料44号、45号、28号、79号、53号5个品种成熟胚培养出的一个月龄的无菌幼苗的茎段为外植体。无菌苗的培养同第三章。1-2培养基12.1芽诱导培养基选择MS、DCR、N6、改良MS(NH4NO3减丫)4种基术培养基。附加NAAO」-O.5mg/L,6-BAO」~2.0!w/L,活性炭0.
3、25%,稀土0.5~30mg/L。12.2茎段腋芽的诱导在上述培养基生长的无菌幼苗，按部位分3种：带仃顶芽的上段0.5cm左右・带腋芽的中段1cm左右、带仃子叶腋芽卜•段1cm左右，分别接种在上述不同培养基上。123芽伸长培养基培养1个“后，在原培养基上继代一次后将诱导生长I个”的芽苗继代在伸长培养基上：MS.DCR、N6、改11MS不加激索的培养基培养1个月。13银杏雌、雄株茎段的离体培养接种时何:分别在2004年2月15日(1)、3月80(11).3月1713(111).4月8日(IV)、，月2I3(V)„材料处理：在
4、I期，芽还没有萌动;在II期,芽刚刚开始萌动时.収银杏成年大树的雌、雄枝条(仍处于木质化阶段).在实验室用门來水培养，促其腋芽萌发，待芽长出后,収具芽接种不同的培养基上。在111、W、V这三个阶段，由于这时腋芽或顶芽己经萌发，顶芽己捕出新悄，収新梢切段做外植体。材料灭菌处理:収回枝条用肥皂粉洗干净,再在流水中冲洗4~5小时，先用70%乙醇灭菌30S,再在4%的NnClO浸泡■分8min>14min>20min3个消希时间段。腋芽诱导培养基：⑴改ft.MS+0.25%AC:(2)WPM+0.25%AC(活性炭)：(3)WPM
5、+NAA0.3mg/L+BA3.0me/L增殖培养基：(1)WPM+O.25%AC：(2)改良MS+0.25%AC1.4培养基的灭菌上述培养基中各附加3%的蘆糖,0.65%的琼脂，调pH值至5.88,分装。最后在三洋牌全门动高压灭菌锅中火菌30mim13培养条件培养温度为25±2*C•光强为1000-20001X的日光灯照明,14h光照，10h黑暗。在培养同时.观察齐种培养呈上外悄休的牛.长状况，测虽芽苗髙度.対数拥用spss11.5统计软件进行统计分析。“茎段高度和叶而积的测定到一定培养时间后.每个品种均匀取出6棵•虽取
6、其高度•叶面积。叶面积测足用方格纸法。1.7石蜡切片制作同第四章。1$激素含址的测定5个品种培养成熟胚为外植体接种在DCR培养基上，生长一个月后，収高度一致、生长状况一致的银杏无菌幼苗.剪成上段0.5cm,中段1.0cm,F段1.0cm三部分,连同叶片、根段、子叶共6部分0.5g,做激素测定。内源激素含虽采用酶联免疫吸附测定法(ELSA)测定。即称取样品0.5g,用80%冷甲醉研惦提取后于4*Cs5000g条件卜离心lOmin,液经C18柱纯化后，用N?气吹L：测ABA、IAA时•要将样品甲酯化.即将2气吹干后的样品，以甲
7、醇溶解,在冰浴条件下与过圮的重氮甲烷反应至黄色，lOmin后加半Sf0.2mol/L乙酸屮醉破坏过量的車組屮烷(黄色消失)，用N2气吹干,再以pH7.4的磷酸缰冲液溶解后进行含量测定。(南京农业大学爾联免疫测定室测定)。2结果与分析2.1顶芽的培养2.1.1不同品种顶芽培养奇度的比较将5个品种的无菌苗的顶芽培养在不加激索的MS培养基上，1个月后•顶芽高度出现差异。从表5・1中可以看出.不同品种顶芽高度以45号最高.53号最低.但方差分析表明•品种之何无显著性差异(F0.01=4.43>F=1.267).表5・1不同品种顶芽
8、培养高度的比较Tabic5-1Comparisionofhighofterminalbudsinfivedifferentofspecies品种号NO.ofspecies培养基Medium接种数cxpalntsamontIS芽高度(cm)highofterminalbuds44MS+NAA0.O4-6-
