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《人血清exosome的分离及其mirna表达特性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、人血清Exosome的分离及其miRNA标志物分析方法的建立标题需更准确的反映全文主要研究工作与结果。李卓，康炜，李蕊，郝晓柯，马越云【摘要】目的分离、鉴定人血清中的Exosome，检测其中miRNA含量和质量，探讨将人血清中ExosomalmiRNA作为疾病分子标志物的可行性。方法采用ExoQuick从人血清中分离Exosome，分别用透射电镜、NanoSight纳米颗粒分析仪和WesternBlot对其进行形态学和分子表型鉴定，使用Agilent2100生物分析仪进行ExosomalRNA质量分析。通过qRT-PCR检测ExosomalmiRNA，并对血清不同
2、组分的miRNA表达量进行比较分析。结果从人血清中可以分离获得圆形或椭圆形囊泡样物，直径主要集中在40-100nm，最大分布峰值为58nm，表达热休克蛋白Hsp70和四跨膜蛋白CD63，确系Exosomes；Agilent2100生物分析仪结果显示，该Exosome中的RNA组分主要为约25nt的小RNA，提示可能为miRNA；qRT-PCR检测证实4种常见miRNA在人血清Exosome中均有表达；进一步对血清的不同组分进行比较，发现Exosome中miRNA的表达量高于全血清样本和去除Exosome的上清（P<0.05）。结论人血清中可以有效分离到Exosom
3、e，其中存在较高浓度的miRNA。分离血清Exosome有利于循环miRNA类的疾病标志物的检出。【关键词】Exosome；血清；miRNA1基金项目：陕西省教育厅专项科研计划项目[12JK0768]作者单位：710032，第四军医大学西京医院检验科（李卓，李蕊，郝晓柯，马越云）；710077，西安医学院第一附属医院检验科（李卓，康炜）通讯作者：马越云，电子信箱：cmbmayy@fmmu.edu.cnEstablishamethodforseparationandanalysisofmiRNAmarkersforserumexosome标题改用名词短语来表述Dev
4、elopment(orEstablishment)ofaprotocolforserumexosomeisolationandmiRNAquantitationLiZhuo*,KangWei,LiRui,HaoXiaoke,MaYueyun*DepartmentofClinicalLaboratory,XijingHospitalAffiliatedtoFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an710032,China.*DepartmentofClinicalLaboratory,FirstAffiliatedHospitalof
5、Xi’anMedicalUniversity,Xi’an710077,ChinaCorrespondingauthor:MaYueyun,Email:cmbmayy@fmmu.edu.cn【Abstract】ObjectiveToisolateandidentifyexosomesfromhumanserum,analyzetheexpressioncharacteristicsofexosomalmiRNA,andexplorethefeasibilityofdetectingexosomalmiRNAinhumanserum.MethodsExosomeswe
6、reisolatedfromhumanserumusingExoQuick,andthenidentifiedbyusingtransmissionelectronmicroscopy,NanoSightnanoparticleanalyzerandWesternBlotformorphologyandmolecularphenotype.ThequalityofexosomalRNAwasanalyzedusingAgilent2100Bioanalyser.ThenqRT-PCRwascarriedouttodetectexosomalmiRNAsindiff
7、erentcomponentsofhumanserum.ResultsExosomesisolatedfromhumanserumshowedroundorovalvesicles,mainlyindiameter40-100nm,andwithmaximumpeakatdistributionof58nm.Moreover,theyexpressed是含有还是表达？Hsp70andfourtransmembraneproteinCD63Four指typefour还是指什么？.Agilent2100Bioanalyzerresultsshowedthatthema
8、jorRN
