糖化血红蛋白(hba1c) 免疫凝集法

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1、项目糖化血红蛋白（HbA1c）方法免疫凝集法目录1.检测原理2.标本采集与处理2.1受检者的准备2.2静脉采血2.3抗凝剂2.4标本处理3.试剂3.1试剂3.2校准品3.3试剂与校准品的稳定性4.仪器5.操作6.计算7.操作性能7.1精密度7.2准确度7.3灵敏度7.4可报告范围7.5特异性7.6干扰8.参考值9.临床意义附录A:参数1.检测原理1．总血红蛋白的测定：非离子变性剂总血红蛋白-------------------------羟高铁血红素2．HbA1c的测定HbA1c的测定建立在免疫抑制比浊法基础上。样本中HbA1c与R1中的抗HbA1c抗体反应生

2、成可溶性的抗原-抗体复合物。加入R2启动反应。R1中过量的抗HbA1c抗体与R2中的多半抗原（polyhaptens）反应生成不可溶的抗原-抗体复合物，吸光度的变化可通过比浊方法检测。2．标本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况。孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟

3、，穿刺成功后立即松开止血带。2.3抗凝剂：全血采用使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。2.4标本处理：用100倍血液标本的溶血剂处理全血（如：全血样本为5ul，溶血剂500ul）,轻晃混合避免起泡，约1-2分钟后标本从红色变成棕绿色后，可以进行样本检测。3．试剂3.1试剂：本科使用北京利德曼生化技术有限公司HbA1c试剂盒，为液体试剂，各组分如下：组成浓度溶血剂：缓冲液0.02mol/L；PH=7.4稳定剂Hb试剂-总血红蛋白试剂：PH=7.4磷酸缓冲液0.02mol/L稳定剂HbA1c-糖化血红蛋白R1:HBA1c抗体>0.5mg/mLMES缓冲液

4、0.025mol/L；PH=6.2HbA1cR2:多半抗原>8ug/ml缓冲液0.025mol/L；PH=6.23.2：校准品使用北京利德曼生化技术有限公司试剂盒提供的标准品。定标液，每瓶加入2mL蒸馏水或去离子水。轻轻混匀，防止产生泡沫。复溶后的标准品在2-8℃可保存3天，-20℃可保存2个月。标准品无需使用溶血剂处理。校准频次：全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3试剂与校准品的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。

5、总血红蛋白试剂为无色透明液体。糖化血红蛋白试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。原包装校准品在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后2-8℃保存可稳定3天，-20℃保存，可稳定2个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。4．仪器YY型号仪器。5．操作样品为用溶血剂处理后的肝素/EDTA抗凝全血。本法为终点法。参数见后附，附录A。6．计算A测定C=————×C0A标准式中：c——测定总血红蛋白浓度，g/dL；A测定——标本管吸光度；A标准——标准管吸光度；CO——校准血清总血红蛋白浓度，g/dL；△A测定C=—

6、———×C0△A标准式中：c——测定糖化血红蛋白浓度，g/dL；△A测定——标本管吸光度；△A标准——标准管吸光度；CO——校准血清糖化血红蛋白浓度，g/dL；7．操作性能7.1精密度：Hb：批内CV<1.25%，批间CV<2.87%。HbA1c：批内CV<2.25%，批间CV<3.87%。7.2准确度：测量结果在利德曼质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。7.3灵敏度：糖化血红蛋白浓度为：2.33g/dL时，显色吸光度为0.155～0.190。7.4可报告范围：总血红蛋白：血清与试剂用

7、量之比为24：270时，测定上限为30g/dL。糖化血红蛋白：血清与试剂用量之比为1：25：10时，测定上限为2.6g/dL。7.5特异性：测量值在给定值的90%-110％范围内。7.6干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。8．参考值总血红蛋白11~17.4g/dL；糖化血红蛋白3.6-6%。9．临床意义9.1HbA1c在DM诊断上的应用DM是一组病因和发病机制尚未完全阐明的内分泌代谢疾病，以高血糖为其主要标志。DM患者HbA1c值空腹血糖呈正相关。在Ⅰ型糖尿病患者

8、中，糖化血红蛋白A1c并不是反映平均血