大肠杆菌转基因体系建立和植物基因组提取

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1、分子生物学实验报告学院：生命科学学院专业年级：生技093姓名：殷晓杰学好：2009013452大肠杆菌转基因体系的建立和植物基因组的提取摘要：分子生物学是在分子水平研究生命现象的一门学科，主要研究生物大分子的结构、功能和生物合成从而阐明生命现象本质。分子生物学在短短的几十年间经历了一个飞速的发展过程，从探究遗传物质的本质到阐明DNA的双螺旋结构，从蛋白质的序列分析到DNA高通量测序，从生物大分子的基本结构到现在的基因组学、蛋白质组学等等，可以看到分子生物学的伟大前进。于此相伴的是分子生物实验技术的飞速革新和发展

2、。分子生物学成了生命科学研究的基础手段和先进前沿，转基因就是热点之一。本文先是对转基因技术作了一个简单的综述，然后主要是描述了实验室大肠杆菌转基因体系的建立和检测方法。实验材料是含p38质粒的大肠杆菌（实验室命名）和TOP10大肠杆菌（用于制备感受态细胞），最后的检测方法是用的经典的southernbloting。另外，本文最后还简述了植物基因组的提取方法。关键词大肠杆菌转基因体系植物基因组提取前言分子生物学是在分子水平研究生命现象的一门学科，主要研究生物大分子的结构、功能和生物合成从而阐明生命现象本质。分子生

3、物学在短短的几十年间经历了一个飞速的发展过程，从探究遗传物质的本质到阐明DNA的双螺旋结构，从蛋白质的序列分析到DNA高通量测序，从生物大分子的基本结构到现在的基因组学、蛋白质组学等等，可以看到分子生物学的伟大前进。于此相伴的是分子生物实验技术的飞速革新和发展。分子生物学已然成了生命科学研究的基础手段和先进前沿，转基因就是热点之一。所谓的转基因技术，是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰的一种实验技术。转基因技术一般可分为目的基因的获得、粘性末端切割和

4、载体的构建及转导这几个过程。按照目的基因受体的不通过可以把转基因技术分为植物转基因技术和动物转基因技术，还有细菌转基因技术。对于植物转基因技术转化方法目前已经得到了很好的发展，基本上可以分成三类：载体介导的基因转化（如农杆菌介导法和病毒介导法）、DNA直接导入法（如基因枪法、PEG法、脂质体法、电激法、显微注射法、激光微束法、超声波法等）和种质系统介导的基因转化（如花粉管通道法、浸泡法和子房、胚囊注射法等）[1]杨翠芹，刘伟王，声斌，叶庆生.转基因在玉兰花上的应用.[j].亚热带植物科学，2004,3（2）：6

5、4-68。转基因动物的制作方法有显微注射法、逆转录病毒感染胚胎法、精子载体法、卵母细胞精子注射法、ES细胞介导的基因转移法及人工酵母染色体法等[2]刘文献.转基因动物技术研究综述.[j].生物技术，2003，vol13(4):39-41。对于微生物转基因技术目的基因的转导，可以通过制备感受态细胞改变细胞的通透性来实现。目前，转基因技术是一个非常热门的研究技术，应用的也是十分普遍，同基因工程、细胞工程紧密联系在一起。转基因的应用和研究热点，有以下几个方面：1.遗传育种传统育种只能在同种或亲缘关系很近的物种之间进行

6、，且自发性突变作为选种的前提，其发生机率相当低。转基因技术则可克服上述问题。通过生物信息学以及分子生物学的方法，预测并获得一定优越性的基因，通过转基因技术获得具有该优良性状新的物种或者改良物种，是转基因技术一个热门的研究方向。现在已经的到了蓬勃的发展，并且还将继续火热下去。1.研究模型的建立利用转基因技术，可以很好的建立生命科学研究的实验室研究的生物模型。例如，现代医学研究证明人类的大多数疾病都与遗传有关，适当的动物模型对研究基因突变而引起遗传疾病的发病机制是十分有效的。而用转基因动物的方法生产人类遗传疾病模型

7、则成为人类遗传疾病研究的一个极为有效的途径[3]左珂菁,苗向阳,谢青梅,梁梓森.转基因动物技术的研究进展及应用.[j].现代生物医学进展，2010，vol.10(3):560-565。2.生物反应器的研究利用转基因受体生产转入基因的产物是转基因技术的另一个重要应用。在动物上，乳腺反应器就是一个较为成功的例子。发酵工程用的菌很多的也是转基因菌，获得的产物有些则是转入目的基因所表达的。3.转基因安全性研究近年来转基因生物安全性问题已引起了公众的普遍担忧,严重制约了转基因技术成果的推广应用。很多研究者从转基因安全性的

8、角度，对转基因技术进行了深入的探究，开发出了许多安全转基因技术。比如：无选择性标记基因技术、安全标记基因技术、叶绿体转化技术、终止子技术、雄性不育技术、外源基因删除技术。其中外源基因删除技术表现出很大的应用前景［４］张茜,张金凤,付文锋,张鸿景,袁文军.安全转基因技术研究进展.[j].遗传，2011，vol.33(5):437-442。综上是转基因技术的一个简单的介绍。可以看出转基因技