毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树ssr标记

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1、毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记第13卷第3期2009年6月生命科学研究LifeScienceResearchVo1.13No.3June20o9毛细管电泳四色荧光检测法

2、分析茶树SSR标记黄建安,李娟,谭月萍2,刘硕谦,李勤,刘仲华(1.湖南农业大学茶学教育部重点实验室,中国湖南长沙410128;2.湖南省茶业有限公司,中国湖南长沙410005)摘要:将毛细管电泳四色荧光检测技术应用于茶树SSR标记分析.该方法采用三引物PCR扩增SSR位点,三引物即在5端加有M13尾巴序列(5.CACGACG’ITGTAAAACGAC.3)的特异正向引物,特异反向引物及带有荧光标记的通用型Ml3引物:为了运用四色荧光检测系统使通过一次毛细管电泳能同时检测3个以上的SSR住点.采用蓝,绿,黑3种

3、不同颜色的荧光染料分别对3个M13引一物进行标记.应用该方法对42个茶树品种(系)的16个SSR住点进行遗传分析的结果表明:此法具有简便,可靠,低成本及高通量的优点;且随着所分析SSR位点数的增加,降低成本的效果更加显着.采用建立的方法,还筛选获得了11个多态性丰富的可应用于茶树遗传研究的SSR标记.关键词:微卫星(microsatellite,SSR);通用M13引物;毛细管电泳;四色荧光检测;茶树中图分类号:$571.1:Q523文献标识码:A文章编号:1007—7847(2009)03.0251.07Te

4、aPlantMicrosatelliteGenotypingbyCapillaryElectr0ph0resis.withFour-ColorFluorescentDetectionTechniqueHUANGJian—an,LIJuan,TANYue—ping,LIUShuo—qian,LIQin,LIUZhong—hua(1.TheKeyLaboratoryofTeaScienceofMin~tryofEducation,HunanAgricuhuralUniversity,Changsha410128,H

5、unan,China;2.HunanTeaCo.,Ltd,Changsha410005,Hunan,China)Abstract:Thecapillaryelectrophoresiswithfour.colorfluorescentdetectiontechniquewasusedtoanalyzethemicrosatellitesinteaplant.ThreeprimerswereusedinonePCRreactionforamplificationofadefinedmicrosatellitelO

6、CUSbythismethod.Thethreeprimerswereasfollows:asequence.specificforwardprimertailedwithM13一tailatits5end.asequence.specificreverseprimerandauniversalfluorescent.1abeledMl3primer(5.CACGACGTrGTAAAACGAC’3).Inordertodetectthreeormoremicrosatellitelocisimultaneous

7、lyineachcapillaryelectrophoresisthroughfour-colorfluorescentdetectionsystem.threeuniversalM13primerswerelabeledwiththreedifferentfluorescencedyes(blue,greenandblack).Withthismethodthegeneticanalysisof16microsatellitelociamong42teaplantswasca~iedout.Theresult

8、sshowedthatthismethodhadmeritsofsimple,reliable,cost—effectiveandhigh—throughputmicrosatellitegenotyping,andtheeconomybroughtbyitbecamegreaterwithanincreasingnumberofmicrosatellitemarkers.Also,1