唾液富组蛋白5作用后白念珠菌超微结构的改变

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1、唾液富组蛋白5作用后白念珠菌超微结构的改变作者：高琪,张金廷,陈惠珍,李庆星【摘要】目的：电镜观察HRPs5作用后白念珠菌超微结构的变化。方法：将一定数量的孢子与一定浓度的HRPs5混合培养后，在扫描电镜下分析对照组与试验组菌细胞的变形率有无显著性差异；并且扫描电镜和透射电镜下观察HRPs5作用后白念珠菌超微结构的变化。结果：扫描电镜观察经过HRPs5处理过白念珠菌孢子表面不光滑并有明显的凹陷和穿孔。5000倍扫描电镜下分析对照组与实验组菌细胞的变形率有极显著性差异（P＜0.001）。透射电镜观察经过HRPs5处理过的白

2、念珠菌孢子可见细胞质内有空泡变性等改变。结论：富组蛋白能破坏白念珠菌的细胞膜，诱导胞内物质丧失，从而导致生物体死亡。【关键词】唾液；富组蛋白5；白念珠菌；抗菌活性　　StudymicrostructureChangesofBlastoconidaAfterinfectedbyslalivaHRPs5　　Abstract:Objective:MicrostructurechangesofblastoconidiaafterinfectedbyHRPs5wereobservedwithSEMandTEM.Method:Som

3、eofblastoconidiaofstandardcandida7albicans(ATCC22019)weremixedwithHRPs5,andculturedbySabourauddextroseagar.TocomparethedifferenceofthepercentageofdeformationbetweenthetreatmentgroupandcontrolgroupunderSEM.Asthesametime,microstructurechangesofblastoconidiaafterinf

4、ectedbyHRPs5wereobservedwithSEMandTEM.Result:BlastoconidiainfectedbyHRPs5hasroughsurfacewithobvioushollowandperforationwithSEM.TherearesignificantdifferentbetweentreatmentgroupandcontrolgroupwithSEMof5000times(P<0.001).OrganellwereunclearandvacuolesformedwithT

5、EM.Conclusion:MicrographssuggestthatHRPs5damagecellmembraneandinducethelossofintracellularmaterials,whichleadingtothedeathoforganism.　　Keywords:Slaliva;HRPs5;Candidaalbicans;Anticandidalactivity　　富组蛋白(histidinerichprotein,HRPs或histatins)是一族存在于灵长类动物腮腺和颌下腺分泌物中富含组氨酸

6、的小分子、阳离子多肽［1～3］。HRPs作为一组内源性多肽，在宿主非免疫防御系统中起重要作用，与多种口腔感染性疾病密切相关［4］。1984年Pollock2等首次报道了HRPs混合物抗口腔白念珠菌作用，本实验用扫描电镜和透射电镜观察HRPs5作用后白念珠菌超微结构的变化。7　　1材料与方法　　1.1实验材料与菌悬液的制备：　　①标准白念珠菌（ATCC），由河北医科大学第二附属医院皮肤科真菌室提供。②沙氏固体培养基：1%蛋白胨、4%葡萄糖、0.025%氯霉素2%琼脂。③沙氏液体培养基：1%蛋白胨、4%葡萄糖、0.05%放线

7、菌酮、0.025%氯霉素。④HRPs5购自Sigma公司。⑤10mM的PPB（PH7.4）：1mM磷酸氢二钾加蒸溜水至1l，1mM磷酸二氢钾加蒸溜水至1l，分别取80.2ml和19.8ml混匀。⑥对数生长期念珠菌菌悬液的制备：标准白色念珠菌常温复苏，接种至沙氏液体培养基，在30℃恒温水浴振荡培养4～6h，1000转/min离心5min，弃上清液，PPB洗涤，用血细胞计数板计数后调整菌悬液的浓度至2×10个/ml。　　1.2分组与方法：　　①实验组：实验管中加入100uμg/ml的HRPs5和对数生长期念珠菌菌悬液（2×1

8、0个/mL）各0.1ml(时此菌悬液的浓度为10个/ml，HRPs5的浓度为50ug/ml)。②对照组：对照管中加入10mM的PPB和对数生长期念珠菌菌悬液（2×10个/mL）各0.1ml，扫描电镜（S-3500N）下观察并照相。③7透射电镜标本的制备：实验管中加入100ug/ml的HRPs5和对数生长期念珠菌菌悬液