小鼠代谢相关检测

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1、八、小鼠代谢相关检测I.葡萄糖耐受实验（GTT）试剂和仪器：，生理盐水（0.85NaCl）糖仪GLUCOCARDII葡萄糖（Cat:G6125Sigma-Aldrich），血SeriesTestMeterARKRAY和血糖试纸GLUCOCARDTestStripIIARKRAY。注意事项：，小鼠葡萄糖耐受实验的葡萄糖使用量一般为1.5g或者2g每公斤体重（1.5or2g/kg）根据具体的实验要求配置合适的浓度的葡萄糖溶液。如葡萄糖使用量是2g/kg，则用生理盐水（saline）配置20的葡萄糖溶液。操作步骤：

2、1．小鼠准备：每组实验（如不同基因型或给药组）小鼠数量不得少于6只，对照组必须是同年龄、同性别的小鼠。于实验前一天下午5点将小鼠换入干净的笼子禁食，禁食16小时，至次日上午9点。禁食期间，小鼠保持正常的饮水；2．次日上午九点，开始葡萄糖耐受实验。称取每只小鼠的体重，并用标记笔在小鼠尾巴的根部标记序号，以便在实验过程中能快速的辨认所测小鼠；3．空腹基础血糖的测定：将小鼠从笼子中取出，轻放于铁网格之上，用剪刀剪去小鼠尾巴末端约1-2mm，轻轻挤压小鼠尾巴，让血液富集成一滴，用血糖仪测定空腹血糖，测定值认定为0mi

3、n的血糖值。操作尽量轻柔，使小鼠不至于过度惊吓；4．让小鼠适应30min之后，开始准备腹腔注射葡萄糖（IPGTT）或灌胃葡萄糖OGTT。5．IPGTT：将小鼠轻轻抓起，按照标准的腹腔注射操作用1ml注射器给小鼠注射葡萄糖溶液。注射的体积根据小鼠的体重决定，每g体重注射0.01ml。从注射完毕一刻起，开始计时；OGTT：将小鼠轻轻抓起，按照标准灌胃操作用1ml注射器连接灌胃针给于小鼠葡萄糖溶液。灌胃的体积根据小鼠的体重决定，每g体重灌胃0.01ml。从灌胃完毕一刻起，开始计时。一般情况下，每只小鼠的操作间隔在1

4、min，这样可以准确的按照所规定时间完成对每只196小鼠的血糖测定。6．在15min，30min，60min，90min，120min按照步骤3的操作测定每只小鼠各个时间点的血糖值；7．实验完毕后，将每笼小鼠补充上饲料。用Excel软件分析实验结果。197II.胰岛素耐受实验（ITT）试剂和仪器：人胰岛素（NovolinR40U/mlNovoNordisk），生理盐水（0.85NaCl），血糖仪GLUCOCARDIISeriesTestMeterARKRAY和血糖试纸GLUCOCARDTestStripIIA

5、RKRAY。注意事项：在胰岛素耐受实验中，胰岛素的用量要根据小鼠的年龄和性别来决定，一般来讲理想的胰岛素用量应该使葡萄糖水平在注射30min后下降到注射前的40左右。小鼠胰岛素耐受实验的胰岛素使用量一般为0.5U至1.2U每公斤体重（0.5-1.2U/kg），根据具体的实验要求将胰岛素稀释到合适浓度。如胰岛素使用量是0.5U/kg，则用生理盐水（saline）配置0.05U/ml的胰岛素溶液。操作步骤：1．小鼠准备：每组实验（如不同基因型或给药组）小鼠数量不得少于6只，对照组必须是同年龄、同性别的小鼠。于上午

6、9点将小鼠换入干净的笼子禁食，禁食4小时，至下午1点。禁食期间，小鼠保持正常的饮水；2．下午1点，开始胰岛素耐受实验。称取每只小鼠的体重，并用标记笔在小鼠尾巴的根部标记序号，以便在实验过程中能快速的辨认所测小鼠；3．将小鼠从笼子中取出，轻放于铁网格之上，用剪刀剪去小鼠尾巴末端约1-2mm，轻轻挤压小鼠尾巴，让血液富集成一滴，用血糖仪测定血糖，测定值认定为0min的血糖值。操作尽量轻柔，使小鼠不至于过度惊吓；4．让小鼠适应30min之后，开始准备腹腔注射胰岛素溶液；5．将小鼠轻轻抓起，按照标准的腹腔注射操作用1

7、ml注射器给小鼠注射胰岛素溶液。注射的体积根据小鼠的体重决定，每g体重注射0.01ml。从注射完毕一刻起，开始计时。一般情况下，每只小鼠的操作间隔在1min，这样可以准确的按照所规定时间完成对每只小鼠的血糖测定；6．在15min，30min，45min，60min按照步骤3的操作测定每只小鼠各个时间点的血糖值；7．实验完毕后，将每笼小鼠补充上饲料。用Excel软件分析实验结果。198III.丙酮酸耐受实验（pyruvatechallengetest）试剂和仪器：，生理盐水（0.85NaCl）糖仪GLUCOCA

8、RDIISeries丙酮酸（Cat:PD0462Sangon），血TestMeterARKRAY和血糖试纸GLUCOCARDTestStripIIARKRAY。注意事项：1.丙酮酸是糖异生（gluconeogenesis）的底物，本实验在腹腔注射入丙酮酸溶液后，通过检测血糖上升的幅度，可以用来评估小鼠糖异生的能力。在本实验中，选用丙酮酸或丙酮酸钠盐进行实验都可以；2.小鼠丙酮酸耐受实验的丙酮酸使用量