家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究

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1、家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前

2、胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究,?2一Z1L们月同裴寺,{j国外农学一蚕业总第53期家蚕蚕素和促前胸腺激素的合成,释放和滴度变化的免疫学研究Akira促前胸腺激素(PTTH)是一种脑神经分泌肽,它作用于前胸腺(PG)以刺激蜕皮激素的合成与释放.最近,已从家蚕头部中分离到这种PTTH,且其部分的初级结构得到了鉴定.家蚕PTTH是一种30-kd蛋白质,由两个相同的或很相似的亚基组成.有趣的是,在

3、从家蚕头部中纯化PTTH的过程中,分离到了另一种肽激素,它对另一种鳞翅且昆虫蓖麻蚕具有促前胸腺激素的活性.这种脑肽分子量为5kd,能在体内也能在体外刺激蓖麻蚕前胸腺(samlaPG),但当用无脑蚕蛹和去头的第4龄蚕作试验时,对家蚕的发育没有发生作用.蚕素一I和蚕素-IV的一级结构已全部得到鉴定以及蚕素一I和蚕素一I的序列部分得到确定.所有蚕素的氨基酸序列是非常相似的,这表明蚕素为一个肽家族.根据其序列与胰岛素的同源性,可以认为蚕素是胰岛素超家族的一员.这些激素一级结构的测定对其研究诸如这些激素的化学合成,抗体的生

4、产以及基因结构分析等方面带来了显着的进展.本文纵揽了在我们实验室取得的最新进展,其中包括了关于这些激素的抗体生产及其在生理研究上应用的未发表的结果.一,单克隆抗体的产生尽管在昆虫神经肽的研究中抗体的应用具有重要的价值,但由于在神经组织中的量极其有限,所以抗体的生产方面几乎没有.现在,对这种激素一级结构的了解已能使我,I,IMizoguchi>l.fJ2一.t以{而育们台成与这种激素各部分相同的合成肽,并生产这些台成激素片断的抗体.我选择了单克隆抗体的生产而不选择多克隆抗体的理由如下:①培养的抗合成激素片断的

5、多克隆抗血清会含有能识别合成昧的抗体,但不会含有能识别天然激素的抗体,②要求排除那种载体蛋白的抗体,载体蛋白对合成肽通常为半抗原的.除台成激素片断之外,纯化的天然蚕素一I也可用作免疫原.由于纯天然蚕素一I的现有数量太少,以致于不能产生令人满意的高滴度抗血清,在这种情况下再次应用单克隆抗体技术以选择使用分泌蚕素抗体的脾细胞.这样,下述的抗体是用鼠单克隆抗体技术产生的;①抗合成十肽(其序列与蚕素一I,一Ⅱ和一I各A链N一端10个氨基酸相同)的抗体;②一种抗纯化的天然蚕素一I的抗体l③一种抗家蚕PTTH的合成N一端十五

6、肽的抗体.1.合成蚕素片断的抗体合成的蚕素片断蚕素一I,蚕素一I和蚕素一I的单克隘抗体已得到生产(图1A,略).用一种能与肽中SH和NH:基反应的异双重功能的试剂N一琥珀酰亚胺基3一(2一Pyridil—dlthlo)丙酸使它们与牛血清清蛋白(BSA)接台(Carlsson等,1978).用这种方法能使5~7mol台成肽与lmolBSA连接.每种接台物50～100gg溶于完全Fround佐剂中,以2星期为间隔连接注射2,.BALB/C鼠体内.蚕■●●●～孤●,●●1993车第1期崮外袭挚一壹业甜素抗体是否产生用点

7、溃免疫结合试验作检测,在此试验中,一种经初步纯化的蚕素用作试验抗原.当鼠血清中这种抗体出现以后,不加佐剂继续在内腹膜上进行辅助注射(5O～10Og接合物).撮晚一次注射后3天,用聚乙二醇4000使鼠脾细胞与鼠骨髓瘤Ns-1细胞融合.在96一孔微板上用培养膜培养杂种瘤,每次融合500~1000孔穴的杂种瘤上清液用点渍免疫结合试验筛选,先用合成激素片断用于免疫接种(第1次筛选),然后用初步纯化的蚕素用于免疫接种(第2次筛选).通过限量稀释,分泌蚕素抗体的杂种瘤被克隆.当鼠以这种方法免疫后,大约有1的杂种瘤——培养孔穴

8、呈阳性表明与初步纯化的蚕素发生反应的抗体已产生.但是,用与对照抗原J~IIBSA和卵清蛋白发生交叉反应的筛选方法筛选了许多这种抗体,到最后,每次融合中只获得了1～2个特异识别天然蚕素的抗体.这样获得的单克隆抗体对蚕素分子形态的特异识别用一种竞争的酶联免疫吸附试验(ELISA)作检测.当这种蚕素一I抗体试验其与蚕素一I,一I和一I的反应活力时,这种抗体对每种蚕素种的亲和性差