多聚酶链式反应答案

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1、山东省平度市第一中学生物学课时授课导学案序   号：15       主备：刘贵溪       审查：付亚楠     审批        〖课   题〗ξ5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段〖学习要求〗尝试PCR技术的基本操作，体验PCR技术的分子生物学实验方法；理解PCR技术的原理；讨论PCR技术的应用【预习指导】在课前时间通过阅读教材、同学交流和讨论，完成下列问题，并初步巩固。一、基础知识【活动1】阅读教材P58“PCR原理”，讨论并回答下列问题：1．（记忆）PCR技术扩增DNA的过程与细胞内的DNA复制过程类似。【思考1】

2、填写下表：（记忆）细胞内DNA复制条件分析条件参与的组分在DNA分子复制中的作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶打开DNA双螺旋RNA聚合酶合成RNA引物DNA聚合酶催化合成DNA子链；切除引物DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来能量ATP为解螺旋和合成子链提供能量引物RNA为DNA聚合酶提供合成的3’端起点2．（理解）细胞内DNA的复制（1）DNA的结构：脱氧核苷酸分子通过3,5－磷酸二酯键连接形成核苷酸长链，两条脱氧核苷酸长链反向平行排列并螺旋化，形成DNA双螺旋结构。（

3、2）DNA的复制：首先，在解旋酶的作用下，由ATP供能，DNA发生解旋形成两条DNA单链。其次，在DNA单链的3’端，在RNA聚合酶在作用下，合成RNA引物。再次，在DNA聚合酶的作用下，从引物的3’端开始合成DNA子链。最后，DNA聚合酶将引物切去，并合成空缺处DNA单链，再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来。3．（记忆）DNA分子复制的人工控制解开螺旋：在80～100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。恢复螺旋：在50～60℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。复制条件：缓冲液，D

4、NA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、两种引物。控制仪器：PCR仪（温度周期性自动调节仪）。【思考2】缓冲液相当细胞内的什么成分？核液。【活动2】阅读教材P59“PCR的反应过程”，讨论并回答下列问题：1．（记忆）填写PCR反应流程： 2．（理解）PCR反应过程是：在升温至90℃以上时DNA解旋；在降温至50℃左右时引物与DNA单链结合；在升温至72℃左右时合成DNA子链。二、实验操作【活动3】阅读教材P62“实验操作”，讨论并回答下列问题：1．（记忆）在PCR反应体系的配方中，含有的成分有缓冲液、DNA模板、四种脱氧

5、核苷酸、热稳定DNA聚合酶、两种RNA引物、水。2．（了解）实验操作步骤：按照PCR反应体系配方配制反应液；将PCR反应体系50μL用微量移液器转移到微量离心管（0.5mL）中；将微量离心管放到PCR仪中；设置PCR仪的工作参数；DNA在PCR仪中大量扩增。3．（了解）水浴法：将微型离心管依次在95℃、55℃、72℃恒温水浴锅中循环处理。三、操作提示【活动4】阅读教材P62“操作提示”，讨论并回答下列问题：1．（记忆）避免外源DNA污染，所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前高压灭菌。2．（记忆）将缓冲液和酶分装成小份，－20℃低温

6、保存。3．（记忆）每添加一种反应成分，更换一个移液器枪头。4．（记忆）混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。四、结果分析与评价【活动4】阅读教材P63“结果分析与评价”，讨论并回答下列问题：1．（记忆）反应液稀释：取2µLPCR反应液，添加98µL蒸馏水。2．（记忆）分光光度计调零：将100µL蒸馏水添加到比色杯中，在260nm处将分光光度计读数调节为零。3．（记忆）将100µL反应稀释液倒入比色杯中，测定在260nm处的光吸收值。4．（记忆）DNA含量计算：DNA含量（µg）＝50×光吸收值×稀释倍数。【活动4】观看视频

7、：观看“多聚酶链式反应扩增DNA片段”视频，学会相关技术方法。 〖课后学习〗1．实践作业：利用网络搜集有关PCR技术的资料或视频。2．书面作业：将基础知识整理到作业本上；完成该节训练题。