微乳液相色谱法同时测定山楂叶提取物中4种黄酮成分

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1、微乳液相色谱法同时测定山楂叶提取物中4种黄酮成分作者：李宁黄光亮李玉兰王铁杰高崇凯【摘要】建立了一种新的微乳体系,用于微乳液相色谱同时分析山楂叶提取物中牡荆素鼠李糖苷、芦丁、牡荆素及金丝桃苷4种黄酮成分。通过对影响分离选择性的主要因素进行考察，得到最佳微乳体系的组成为:1.0%(w/w)聚氧乙烯月桂醇（Brij35）1.1%(w/w)正丁醇0.1%(w/w)正辛醇0.3%三乙胺(V/V)(H3PO4调节至pH2.5)。在此微乳体系中，表面活性剂类型和浓度、油相种类、添加剂三乙胺、流动相的pH值对4种黄酮成分的分离起到

2、了重要的作用。选择VenusilASBC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)，流速为0.8mL/min，检测波长为360nm，柱温为35℃。结果显示，4种黄酮成分在27min内达到基线分离，在0.95～140.8mg/L范围内，4个黄酮成分的线性相关系数r≥0.9995，平均回收率98.6%～101.6%。本方法可应用于山楂叶提取物中4种主要黄酮成分的质量分析。【关键词】微乳液相色谱,山楂,提取,黄酮　　1引言　　山楂叶为蔷薇科植物山里红(CrataeguspinnatifidaBge.11Var.majorN.E

3、.Br.)或山楂(CrataeguspinnatifidaBge.)的干燥叶。具有活血化瘀、理气通脉的功能。《中国药典》2005版[1]已收载山楂叶以及山楂叶提取物制剂——益心酮片。研究发现，山楂叶中所含的黄酮类成分对心血管系统有明显的药理作用[2]，主要含牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、芦丁、牡荆素、金丝桃苷等黄酮成分[3]。对山楂叶提取物中多种有效成分的主要分析方法有HPLC法[4,5]、梯度HPLC法[6,7]和毛细管电泳法[8]。由于山楂叶提取物中含有黄酮苷和苷元成分，它们的极性相差较大，用等强度洗脱保留时间较长

4、，一般采用梯度洗脱才能在有效的时间内完成检测。微乳液相色谱（MELC）是一项液相色谱新技术。应用较多的是水包油型反相MELC，其分离机制是溶质在固定相、伪固定相（表面活性剂在固定相的吸附层）、多相分散相（微乳液滴）、水相进行的动态吸附解析过程[9]。由于分离过程的复杂性，可控参数较多，使得具有不同极性的组分在等度洗脱下，且在短时间内达到有效的分离。MELC应用主要体现在多组分化学药的分离[10,11]、药物制剂[12,13]以及生物样品的分析[14]，在中药分析方面还未见报道。本研究应用MELC法对山楂叶提取物的分离与测定

5、，使山楂叶提取物中的主要有效成分牡荆素鼠李糖苷、芦丁、牡荆素、金丝桃苷得到有效的分离，建立了准确可靠、稳定快速的检测山楂叶提取物中4种黄酮苷类成分的方法。　　2实验部分11　　2.1仪器，药品与试剂　　高效液相色谱仪：LC10ATvp泵，SPD10Avp紫外检测器（日本Shimadzu公司）；色谱工作站：HW2000（南京千谱软件有限公司）；ELGA超纯水仪；QT330柱温箱（天津旗美科技有限公司）。　　牡荆素(Vitexin,VI)、牡荆素2″O鼠李糖苷(Vitexin2″Orhamnoside,VR

6、)、金丝桃苷(Hyperoside,HY)、芦丁(Rutin,RU)（中国药品生物制品检定所）；山楂叶提取物（广东药学院药剂教研室提供）；甲醇和乙腈（色谱纯，Dikma公司）；十二烷基硫酸钠（SDS，99.9%，Sigma公司）；聚氧乙烯月桂醚（Brij35，99.9%，Amresco公司）；正丁醇、异丙醇、正辛烷、正辛醇、四氢呋喃等均为分析纯，水为色谱用超纯水。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备称取真空干燥至恒重的牡荆素鼠李糖苷、芦丁、牡荆素、金丝桃苷对照品各适量，精密称定，分别置25mL容量瓶中，加适量

7、50%乙醇超声溶解，至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。　　2.2.2供试品溶液的制备11称取真空干燥至恒重的山楂叶提取物约57mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加适量50%乙醇超声溶解，至刻度，摇匀。过滤，准确移取续滤液2mL，置10mL容量瓶中，以50%乙醇定容，摇匀后，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液为供试液。　　2.2.3微乳流动相配制将微乳成分表面活性剂（SDS、Brij35）、油相（正辛烷、正辛醇、正庚烷）、助表面活性剂（正丁醇）及水按顺序混合，超声30min，即得透明稳定的微乳液，0.45μm滤膜过滤后，备用。

8、　　2.3色谱条件　　VenusilASBC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)；柱温35℃；流速0.8mL/min；检测波长360nm；1.0%(w/w)Brij351.1%(w/w)正丁醇0.1%(w/w)正辛醇0.3%(V/V)三乙胺（H3PO4调节pH2.5）；进样量10μL。