干化学和湿化学方法对乳糜血标本总胆红素测定比较

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1、干化学和湿化学方法对乳糜血标本总胆红素测定比较【摘要】目的：通过对干化学方法和湿化学方法测定乳糜血标本总胆红素的比较，寻找适合测定乳糜血标本总胆红素的方法。方法：12份乳糜血标本分别用干化学方法和湿化学方法测定血清总胆红素。结果：用干化学方法较湿化学方法测定乳糜血标本总胆红素含量低。结论：干化学方法较湿化学方法更适合对乳糜血标本总胆红素测定。【关键词】乳糜血;总胆红素;干化学;湿化学临床生化检测中经常有乳糜血标本。乳糜血标本中乳糜微粒造成血浆颜色呈乳白色或混浊状。临床生化采用湿化学方法测定的总胆红素(TBIL)、白蛋白、肌酐等生化指标

2、结果常受乳糜血干扰，常呈假性升高，导致检测结果失效，不能为临床提供真实可靠数据。本实验通过对干化学方法和湿化学方法测定乳糜血标本TBIL的比较，寻找较适合测定乳糜血标本TBIL的方法。　　1材料与方法　　1.1材料12份临床急诊病人乳糜血标本。首先用干化学方法检测全部乳糜血标本中TBIL含量，然后在0.5h内采用湿化学方法检测全部标本中TBIL含量。5　　1.2仪器与试剂干化学方法测定仪器是美国强生VIPROS-350，试剂由美国强生公司提供。湿化学方法采用的仪器是日东芝TBA-120FR，试剂由上海复星长征医学科学有限公司提供。两种

3、方法均严格按说明书进行操作。　　1.3统计方法用配对设计资料的秩和检验比较两组数据的差异，取α=0.05，单侧T检验。　　2结果　　用干化学方法较湿化学方法测定乳糜血标本TBIL含量低，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。采用干化学方法测定的12份乳糜血标本的血清TBIL值全部都在参考值范围内，而采用湿化学方法测定的值全部都假性升高，且高于参考值范围2～20倍。详见表1。　　3讨论　　乳糜血血浆颜色呈乳白色或混浊状，表示血液中含有大量脂肪。乳糜血中乳糜微粒是由TG、CH、磷脂及载脂蛋白共同组成的载脂蛋白。正常人血浆中的表1

4、干化学和湿化学方法测定TBIL结果乳糜微粒空腹125h后就被完全清除。乳糜可造成血浆浑浊，脂浊使血清分布呈现非均一性，严重影响常规采用可见光及紫外光光度法中湿化学方法测定TBIL、白蛋白、肌酐等生化指标结果的可靠性，导致结果常成假性升高,不能为临床提供真实可靠数据。本实验测定12份乳糜血标本TBIL含量，干化学方法较湿化学方法测定乳糜血标本TBIL含量低，差异有统计学意义。采用干化学方法测定的12份乳糜血标本的血清TBIL值全部都在参考值范围内，而采用湿化学方法测定的值全部都假性升高，且高于参考值范围2～20倍，因此认为干化学方法较湿

5、化学方法更适合对乳糜血标本TBIL测定。　　干化学方法和湿化学方法均采用可见光及紫外光光度法中的对比法[1]。干化学方法和湿化学方法测定血清TBIL反应原理一致，均为TBIL与重氮盐(N-羟甲基硫酰)六氮磷酸重氮苯反应，生成具有相似摩尔吸光特性的偶氮胆红素色基，其吸光峰值位于540n5m附近。干化学方法建立在一种修改的经典重氮反应的基础上。反应在干燥的载玻片上。载玻片由5层构成，分别为干片上层、扩散层、试剂层、支持层、干片底层。湿化学方法测定血清TBIL反应试剂和血清所有成份均在一起。采用干化学方法测定TBIL时，将一滴患者样本滴在干

6、片上，并通过扩散层均匀分布到下面的试剂层，扩散层不仅可阻留细胞、结晶和其他小颗粒，也可以根据需要让大分子，如蛋白质等滞留，以提高分析的特异性。因此该层可以阻留乳糜微粒等物质，起到抗乳糜微粒干扰的作用。同时当待检样品通过扩散层后，可以消除溶液中影响检测反应的干扰物质。扩散层中的某些特殊物质一方面可用来掩盖待检样品中的有色物质，使反射光度计的测定结果不受影响。湿化学方法测定血清TBIL反应试剂与血清所有成份在一起，因此则该反应方法不能起到抗乳糜微粒干扰的作用，这是引起湿化学方法测定乳糜血标本TBIL值偏高的主要原因。同时该反应方法不能消除

7、溶液中影响检测反应干扰物质以及不能掩盖待检样品中的有色物质，使反射光度计的测定结果受到影响。干化学方法测定TBIL时试剂层提供用于测定胆红素重氮反应的反射背景，其中含有用来测定胆红素所需的所有试剂，通过重氮盐反应，然后通过透明的支持层，在540nm和460nm两个波长下测定偶氮胆红素色基，以确定TBIL浓度。540nm下的反射测定用于矫正光谱干涉。采用双波长测定可以通过副波长加以修正，减少甚至消除干扰因素，提高测定准确性。而湿化学方法测定血清TBIL采用单波长(540nm)，单波长测定易受样品溶血、黄疸、脂浊等因素干扰，这也是干化学方

8、法测定血清TBIL较湿化学方法准确的原因。干化学方法反应底物进入指示剂层，在这里发生显色反应。此层包含染料或相似的指示剂，使反应产物到达指示剂层后生成了有色化合物，其颜色变化与分析物浓度成比例，被反射光检测。由于光线不通