巯基受损对内皮细胞no系统的影响

《巯基受损对内皮细胞no系统的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、巯基受损对内皮细胞NO系统的影响【摘要】　　目的通过检测巯基螯合剂DEM对内皮细胞二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)活性的影响，探讨马来酸二乙酯(DEM)对内皮细胞NO通路功能障碍的影响。方法找出处理内皮细胞时DEM作为巯基螯合剂的最适剂量和时间。以最适DEM剂量和时间预处理内皮细胞后，继续培养24小时，检测各时间段的DDAH活性及NO含量。结果DEM最适剂量为0.6umol/L，最适作用时间为30分钟。经DEM预处理后DDAH活性随之降低，至2小时时达最低值，以后DDAH活性逐渐恢复；NO含量在DEM预处理后显示相似的改变。结论DEM可导致内皮细胞NO通路功能障碍。提示DDA

2、H活性降低可能与DDAH的巯基受损有关，进一步提示保护DDAH的巯基是对抗各种NO通路功能障碍因素的重要途径之一。【关键词】谷胱甘肽(GSH)二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）一氧化氮(NO)氧化应激　　AbstractObjectiveToinvestigatetheeffectofDEMonthefunctionofNOpathwayinendothelialcellsbydetectingtheimpactofDEMontheactivityofDDAHinendothelialcells.MethodsThemostsuitabledosageandthebesttim

3、eofDEMassulfhydrylchelatingagentwhentreatingendothelialcellsweresearchedout,afterprotreatedwiththerightdosageatright10time,theendothelialcellswerekeptculturedfor24hours;theactivityofDDAHandthecontentofNOateachtimeintervalsweredetectedrespectively.ResultsThemostsuitabledosageofDEMwas0.6umol/Lw

4、hilethebesttimewas30minutes;afterthepro-treatmentofDEM,theactivityofDDAHdecreasedandreachedthelowestlevelin2hours,andthentheactivityofDDAHgraduallymountedup;similarchangeswerefoundinthecontentofNOaftertheprotreatmentofDEM.ConclusionsDEMmayleadtothedysfunctionofNOpathwayinendothelialcells;itis

5、indicatedthattheactivitydecreaseofDDAHmayberelatedwiththesulfhydryldamageofDDAHanditisfurtherindicatedthattoprotectthesulfhydrylofDDAHisoneofthemostimportantconfrontationstovariousfactorsofdysfunctionofNOpathway.　　Keywordsglutathione(GSH)dimethylargininedimethylaminohydrolase(DDAH)Nitricoxide

6、(NO)oxydativestress　　内皮细胞分泌的一氧化氮(NO)是调控心血管功能的最重要因子之一，NO通路的功能障碍参与了动脉粥样硬化的发生发展。氧化应激被认为是引起内皮NO系统功能障碍的重要原因。研究证实，NO合酶抑制物10不对称二甲基精氨酸(ADMA的增多可能是造成NO通路功能障碍的重要机制之一。而ADMA在体内的增多主要与其分解代谢酶二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）的功能障碍密切相关［1，2］。DDAH活性中心的半胱氨酸残基(SH)被认为是各种因素素作用于DDAH活性的靶点。为探讨此种可能性，我们以巯基耗竭剂马来酸二乙酯(DEM)作用于内皮细胞，因为已有实验

7、证实，DEM可以通过与GSH发生鳌合迅速而短暂地消耗细胞内的GSH［3］，但DEM是否可对DDAH产生相似的影响尚未见报道。　　１材料和方法　　1.1药品和试剂小牛血清、RPMI1640培养基、DEM、二乙酰一肟、安替比林、三氯醋酸、邻苯二醛、N乙基马来酰亚胺。　　1.2细胞株内皮细胞株ECV304由四川大学免疫教研室提供。　　1.3仪器CO2培养箱（德国Heraeus公司）；荧光分光光度计（日本岛津公司）；550型酶标仪（Biorad公司）；不对称二甲基精氨酸ADMA购自S