尿液微量白蛋白测定方法的比较

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1、尿液微量白蛋白测定方法的比较【摘要】目的通过尿液微量白蛋白测定方法的比较，了解同一实验样本不同的实验条件下，对结果的影响。方法本文采用了临床常用的经典手工操作方法与一种操作简便，快速的自动分析的方法进行了对比实验。结果线性范围0～2g/L，回收率，双缩脲法为97.2%，邻苯三酚红钼法为98.7%。重复性测定，变异系数均小于2%。结论两种方法均可以采用。【关键词】尿液;微量白蛋白测定;方法比较尿液微量白蛋白定量测定是临床上肾脏疾患不可缺少的诊断指标，尿液中排出蛋白质量的改变可直接反映肾实质功能的变化，本文做了两种尿液微量蛋白质定量测定方法的比较实验，现报告如下。

2、　　1材料与方法　　1.1试剂0.075mol/L硫酸溶液(自配)，15g/L钨酸钠溶液(自配)，双缩脲试剂(试剂公司)，1g/L白蛋白标准液用40g/L白蛋白标准液(试剂公司)稀释，即0.5ml40g/L白蛋白标准液加生理盐水稀释至20ml备用。邻苯三酚红钼显色试剂(试剂公司)。　　1.2仪器721分光光度计(上海)CX7生化全自动分析仪(BCM)。4　　1.3方法随机采集我院门诊或住院病人的尿液蛋白质试验阳性2～4“+”的尿液样本，准确收集并记录24h的尿量，混匀后取8～10ml尿液样本2000r/min离心5min，留取上清液备用。　　1.3.1双缩脲比

3、色法取备用的尿液上清液5ml加入10ml离心管中，再依次加入0.075mol/L硫酸溶液2.5ml，15g/L钨酸钠溶液2.5ml，充分混匀后静止10min，3000r/min离心5min，弃去上清液并将离心管倒置于吸水滤纸上，沥干液体，保留沉淀，再准确加入生理盐水1ml充分混匀，以溶解管中沉淀的蛋白质，作为测定管。　　另取试管两支，分别标明标准，空白管，依次加入1g/L白蛋白标准液1ml，生理盐水1ml,然后三管各加入双缩脲试剂4ml，混匀37℃水浴30min，空白管调零，540nm波长比色，记录测定管和标准管的吸光度。　　计算：24h尿液蛋白总量(G)=测

4、定管吸光度/标准管吸光度×1/5×24h的尿量(L)　　1.3.2邻苯三酚红钼法显色剂为测定试剂。参数设置：波长600nm，温度37℃，反应方式：终点法。反应时间：300s。样本/试剂：1：60。4　　测的结果乘以24h尿量(L)即为24h的尿液蛋白质总量。　　2结果　　2.1线性范围我们用两种方法同时做了65份尿液样本，并用0～4g/L的白蛋白标准液做了线性范围实验，其线性范围均在0～2g/L之间，可以完全满足临床实验的需要。　　2.2回收率在测定样本含量为0.25、0.5、0.75的尿液样本中各加入1g/L的白蛋白标准液，同时用两种方法测定，双缩脲法回收率

5、为97.2%，邻苯三酚红钼显色法98.7%。　　2.3重复性取尿液样本含量为0.5、1.0、1.5、2.0的4份样本，平行测定10次，两种方法的变异系数均小于2%。　　3讨论4　　尿液微量白蛋白是在病理情况下尿液蛋白质的主要成分，临床实验室通常主要以测定尿液微量白蛋白的方法提示肾功能的早期损害，且随着临床治疗的进行，可以作为疗效观察的一种粗筛实验，所以，尿液微量白蛋白的测定方法及所得结果准确性直接关系到临床诊断治疗的效果。本文用两种不同的方法测定了尿液微量白蛋白，其线性范围、回收率、重复性均在可信范围内。笔者认为双缩脲法是一种蛋白质测定经典的测定方法，显色稳定

6、，重复性好。对白蛋白、球蛋白的反应的灵敏度较一致，只是操作方法比较繁琐，容易因操作中的疏忽造成蛋白质的丢失，引起结果偏低。而邻苯三酚红钼显色法，是一种染料结合的方法，主要与白蛋白结合形成一种染料复合物，反应速度快，特异性强，且使用了自动分析，避免了手工操作的操作误差，简便快速，显色稳定，重复性好。又由于肾功能受损时的病理尿液中白蛋白是蛋白尿的主要成分，因此，在严格操作的情况下，两种方法均可采用。4