小鼠原始生殖细胞定向分化为神经样细胞的研究

《小鼠原始生殖细胞定向分化为神经样细胞的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、小鼠原始生殖细胞定向分化为神经样细胞的研究【摘要】目的：探讨微囊对原始生殖细胞(PGCs)定向分化为神经样细胞的诱导效果。方法：用原代PGCs经悬浮培养获取类胚体(EBs);将孕13d胎鼠的大脑半球取出，将其中的神经干细胞(NSCs)作为包在微囊里的成分。待EBs贴壁后将含有NSCs的微囊放入其中，同时另外孔板中放入等量的EBs让其自然分化。将微囊诱导分化出的细胞进行NESTIN、NSE和GFAP免疫染色鉴定。结果：用微囊诱导定向分化为神经样细胞的比例显著高于自然分化的比例。结论：悬浮培养可使PGCs形成EBs，将EBs贴壁培养可自发分化形成内、中和外三个胚层的细胞，即上

2、皮样细胞、成纤维样细胞和神经样细胞。通过微囊的诱导方法可以使EGs定向分化为神经样细胞。【关键词】原始生殖细胞;细胞分化;Western免疫印迹;神经干细胞;小鼠　　[ABSTRACT]Objective:ToexploretheinducingeffectofmicroencapsulationondifferentiationofPGCs(primordialgermcells)intoneuronalcells.Methods:Tookcerebrafromthe13daysoldmouseembryos,encapsulatedneuronalstemcells

3、(NSCs)collectedfromthecerebraintomicroencapsulation.EBs(embryoidbodies)wereformedfromthePGCscollectedfrom138daysmouseembryosbysuspensionculture.ThemicroencapsulationwereputinthecultureplatesaftertheEBswereplatedongelatincoatedcultureplates.Furthermore,thesameamountofEBswereplatedongelati

4、ncoatedcultureplateswithoutmicroencapsulationforspontaneousdifferentiation.TheneuronalcellsweredetectedwithNESTIN,NSEandGFAPimmunohistochemicalstaining.Results:Therateofdifferentiationbymicroencapsulationwasdistinctlyhigherthantherateofspontaneousdifferentiation.Conclusion:Thenutritional

5、componentssecretedfromthemicroencapsulationentertheculturemediumandcaninducethedifferentiationofEBsintoneuronalcellseffectively.　　[KEYWORDS]Primordialgermcell;Celldifferentiation;Westernblot;Neuronalstemcells;Mouse　　原始生殖细胞(primordialgermcells,PGCs)是一种胚胎源性干细胞，具有体外分化为各种组织的能力[1]，我们已探讨了其体外自发分

6、化的能力，发现其分化为神经样细胞的百分比最大。为了进一步提高神经样细胞的分化率，本文将重点探讨PGCs向神经样细胞定向分化的新方法，即微囊诱导法。8　　1材料与方法　　1.1材料　　ICR小鼠。　　1.2方法　　1.2.1PGCs的分离、提取和体外培养实验使用自配13d胎鼠，取两侧生殖嵴，用PBS洗3次后添加0.25%胰蛋白酶消化，吹打，然后过60目细胞筛，将PGCs按2.5×106/mL的密度接种于35mm的培养瓶中进行体外培养。　　1.2.2悬浮培养(1)类胚体(embryoidbodies，EBs)的形成：取分离提取的PGCs，置于培养瓶中进行悬浮培养，培养期间每隔

7、1～2h摇晃1次培养瓶防止PGCs贴壁。换液方法：将含细胞的培养液放入离心管里1000r/min离心10min，弃上层液体，补足培养液。(2)EBs的鉴定:使用免疫组织化学法，对EBs进行甲胎蛋白(alphafetoprotein，AFP)标记，将悬浮培养4d的EBs经4%多聚甲醛固定15min，然后用甲醇在-20℃固定5min，5%BSA覆盖EBs，处理45min以封闭非特异性染色。然后滴加一抗(兔抗人AFP多克隆抗体工作液购自中杉公司，ZA0008)，在4℃8孵育过夜，继之滴加生物素化山羊抗兔IgG，最后滴加DAB显色。