尖锐湿疣组织样本中hpv的检测与分型及临床意义

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1、尖锐湿疣组织样本中HPV的检测与分型及临床意义【摘要】目的研究尖锐湿疣（CA）患者人乳头状病毒（HPV）感染的基因型别，CA患者中高危型HPV感染的情况。方法采用基因芯片的方法对77例CA患者和同期无外阴CA的64例对照进行HPV检测及分型。结果77例CA患者标本中检出HPV阳性64例，阳性检出率84.4%，高于对照组的18.75%（P＜0.01），共检出12种HPV基因型别，其中低危型（HPV6、11、43、44）感染21例，占32.8%；高危型（HPV16、18、31、33、45、56、58、73）感染3

2、0例，占46.9%；高低危同时感染13例，占20.3%。结论外阴CA患者HPV感染较为普遍，且高危型感染占有相当大的比例，因此对CA患者进行HPV-DNA检测，必要时进行相应治疗，以期降低宫颈癌的发病风险。【关键词】尖锐湿疣HPV检测与分型一、材料和方法1.标本来源标本选自2009年7月～2010年11月来我院妇科门诊诊治CA患者共77例，均有CA的典型临床表现，醋酸白试验阳性。采用剪除法剪取宫颈组织标本约0.2cm*0.2cm*0.3cm。对照组为妇科体检人群的宫颈脱落细胞标本64例。采集的标本随即放入盛有

3、0.9%生理盐水的灭菌试管中，实验组用铝箔包裹CA组织并编号贴上标签投入液氮罐（-196℃）中冷冻保存，对照组宫颈脱落细胞在灭菌生理盐水试管中洗涤后冷冻保存。32.试剂HPV基因分型检测试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供。3.方法（1）标本DNA抽提按照DNA抽提试剂盒说明书进行，CA组织先行用组织匀浆器磨碎，操作中避免污染，保证每份标本1管。（2）基因芯片检测23种HPV-DNA亚型采用生物素标记探针对HPV-DNA所有亚型的通用引物经GP-PCR对标本抽提DNA扩增。PCR反应条件为：50℃UNG酶消化

4、15min，95℃预变性10min;94℃30s，42℃90s，72℃30s，共40个循环，72℃延伸5min。固定针对HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4亚型探针的芯片。于50mlBDFalcon聚丙烯管中加入5-8mlA液（2*5sc，0.1%SDS，PH7.4），然后放入10mlGP-PCR产物和基因芯片，沸水水域10min，51℃杂交1h。将杂交后的芯片立即移至装51℃预热50mlB液（0.5*S

5、SC，0.1%SDC，PH7.4）于51℃轻摇洗涤15min，然后将芯片转至20mlPOD溶液于室温孵育30min，再用C液（0.1mol/L柠檬酸钠，PH5.0）于室温轻摇洗涤芯片1～2min后，于显色液（19ml0.1mol%L柠檬酸钠，1mlTMB，10μl3%过氧化氢）中浸泡约10min对芯片进行显色反应。根据显色斑点在芯片上的位置判读结果。二、结果377例CA组织中，检出HPV-DNA阳性64例，阳性检出率84.4%。所有HPV阳性标本均成功分型，共检出12种HPV基因型别，其中低危型（HPV6、1

6、1、43、44）感染21例，占32.8%；高危型（HPV16、18、31、33、45、56、58、73）感染30例，占46.9%；高低危同时感染13例，占20.3%。对照组HPV阳性检出率为18.75%（12/64），与CA组相比较，有显著性差异（P＜0.01）。三、讨论HPV是一种小的DNA双链病毒，目前发现的能感染生殖道的HPV亚型已有100余种，临床上分为两类：宫颈癌低度相关（低危）型和高度相关（高危）型。与妇科病人相比，性病的CA患者群是100%的HPV感染人群，本次试验结果显示77例CA患者高危型（

7、HPV16、18、31、33、45、56、58、73）感染30例，占46.9%；高低危同时感染13例，占20.3%，占有相当大的比例。此类HPV高危型感染患者，除了治疗尖锐湿疣皮损外，还应定期观察检测，对于及时发现早期癌变，减少死亡的发生率有着极为重要的意义。参考文献[1]刘元林，刘荣卿，陈鸿书，等人乳头瘤病毒及癌基因在人生殖器癌发生中的作用［J］.临床皮肤科杂志，1995,4:216.[2]谭晓燕，赵静，刘小宁etal.珠海市正常人群妇女宫颈人乳头瘤病毒感染情况分析.中国妇幼保健，2005,20（12）：1

8、726～1727.[3]张菊，高艳娥，赵锦荣，等.HPV检测在宫颈癌预警和筛查中的研究［J］.国外医学妇产科学分册，2003,30（5）：319～322.3