小鼠reg3α基因cdna成功转染min6细胞株并促其生长

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1、小鼠Reg3α基因cDNA成功转染MIN6细胞株并促其生长作者：崔巍，黄葶，施秉银，刘军【摘要】目的建立一过表达Reg3αcDNA的胰岛MIN6细胞株，研究其在低葡萄糖环境中的生长特性。方法将全长Reg3αcDNA插入到质粒载体pcDNA3.1中，并将Reg3αpcDNA3.1和pcDNA3.1空载体用脂质体法转染胰岛MIN6细胞，分别获得Reg3αcDNA过表达和空载体pcDNA3.1MIN6细胞。应用RealtimePCR和Westernblot方法检测这两种细胞在低葡萄糖培养基中Reg3α的表达，并用MT

2、T法测定Reg3α过表达对MIN6细胞生长的影响。结果有三株Reg3α转染的细胞株显示Reg3α的高表达，在空载体转染的MIN6细胞株中未检测到Reg3α的表达，Reg3αmRNA和蛋白水平分别平均升高6～10倍。用Westernblot检测发现Reg3α蛋白释放到培养液。采用MTT法测定，与空载体转染的MIN6细胞株相比，三株Reg3α稳定转染细胞株，7d后细胞数目升高2倍。结论本研究结果表明已成功地建立了过表达Reg3αcDNA的胰岛MIN6细胞。Reg3α可能具有内分泌作用，促进胰岛细胞生长。【关键词】MIN

3、6细胞株；胰岛；Reg基因；转染；生长ABSTRACT:ObjectiveTocreateaMIN6cellline12overexpressingmurineReg3αcDNAandtoinvestigateitscellviabilitycharacterunderlowglucoseconcentrations.MethodsThefulllengthmurineReg3αcDNAwasinsertedintotheplasmidpcDNA3.1().ThenMIN6cellsweretransfecte

4、dwiththeReg3αpcDNA3.1andpcDNA3.1vectoralonetoestablishReg3αoverexpressionandemptyvectorMIN6cellline.Reg3αproteininthelowglucoseconcentrationcellmediumwasdetectedbyWesternblot.CellviabilitywasevaluatedbyanMTTreductionconversionassay.ResultsThreeReg3αoverexpr

5、essionMIN6cellswereconfirmedbyrealtimePCRandWesternblot.Reg3αexpressionwasbarelydetectableinthecellstransfectedwiththeemptyvectoralone.Incontrast,thelevelsofReg3αmRNAandproteininthreepcDNAReg3αtransfectedcloneswereincreasedbyanaverage10and6fold,respective

6、ly.WesternblotalsorevealedReg3αproteinreleaseintotheculturemedium.InMTTcellproliferationassay,comparedtovectortransfectionalone,threeclonesofReg3αoverexpressionMIN6cellsexhibited2foldincreasesincellnumberover7dayswhenculturedinthepresenceof10mL/Lfetalbovine

7、serumand5.5mmol/Lglucose.ConclusionTheReg3αoverexpressionMIN6cellshavebeenestablished.Reg3αproteinwasdetectableinculturemedium,supportinganendocrineaction,12andReg3αoverexpressionpromotedisletcellgrowth.KEYWORDS:pancreaticislet;Reg3αgene;transfection;MIN6cell

8、line1988年，TERAZONO等[1]发现对胰腺切除90%的大鼠喂饲多聚(ADP核糖)聚合酶抑制剂—尼克酰胺后可以促进胰岛的新生。从新生胰岛cDNA文库中分离得到Reg基因(regenerationassociatedgene)，可翻译一种刺激胰岛β细胞生长的分泌蛋白，改善切除90%胰腺的糖尿病鼠及非肥胖糖尿病(NOD)鼠的疾病状态。1997年命名