转染il-17基因对小鼠胃癌细胞生物学特性的影响及其促肿瘤机制研究

《转染il-17基因对小鼠胃癌细胞生物学特性的影响及其促肿瘤机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、目录中文摘要一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯D．LllgB⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文转染IL．17基因对小鼠胃癌细胞生物学特性的影响及其促肿瘤机制研究引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7第一部分转染IL—17基因对小鼠胃癌细胞体外生物学特性的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9月U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯--⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24讨{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·27第二部分皿．17基因修饰小鼠胃癌细胞的体内促肿瘤作用研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯’jl材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一32结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·37附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·42讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·45参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯·45结j念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯“⋯⋯一47综述IL．17在肿瘤免疫中作用的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58中文摘要转染IL．17基因对小鼠胃癌细胞生物学特

4、性影响及其促肿瘤机制研究摘要目的：IL．17是一种主要由活化的人记忆CD4+T细胞分泌的促炎细胞因子，在固有免疫和适应性免疫中发挥作用，参与细胞的增殖分化、生物因子的转录与表达、机体的免疫调节及肿瘤生长。本研究采用IL-17真核表达载体pcDNA3．1一儿，17转染小鼠胃癌细胞株MFC，过表达IL．17，观察m，17过表达后对MFC细胞体外生长及其它生物学性状的影响，进～步通过建立荷瘤小鼠动物模型观察IL．17过表达后MFC细胞在小鼠体内的成瘤效应，并分析其分子改变，以期探讨Thl7／IL一17在胃癌发生发展中的作用机制。方法：l将IL．17真核表达载体pcDN

5、A3．1一IL一17转染小鼠胃癌细胞株MFC，同时将pcDNA3．1空载体转染MFC细胞作为对照组细胞，经G418筛选后获得稳定表达IL．17的阳性细胞克隆(ⅪC／Ⅲ一17)。2倒置显微镜下观察MFC、MFC／pcDNA3．1及MFC／IL一7细胞的形态变化，RT-PCR检测IL一17基因表达，ELISA法检测细胞分泌IL—17的能力。3MTT法测定转染前后细胞的体外增殖反应并绘制生长曲线。流式细胞技术检测细胞凋亡率的变化。4RT-PCR法检测转染前后细胞内趋化因子CCR6、。CCL20,CXCL2和免疫调节因子VEGF、MMP，9、IL．6的表达变化。5分别以

6、MFC、MFC／pcDNA3．1和MFC／IL一17细胞接种615小鼠，建立荷瘤小鼠动物模型，观察小鼠成瘤及皮下肿瘤生长情况。6接种肿瘤细胞3周后处死小鼠，RT-PCR法检测肿瘤组织内IL，17、VEGF和PodoplaninmRNA表达。Western．blot法检测肿瘤组织内IL—17、VEGF和Podoplanin的蛋白表达。免疫组化法检测肿瘤组织内微血管的形成情况。结果：中文摘要l将IL．17基因转染小鼠胃癌姗C细胞，建立MFC／IL．17细胞株。光学显微镜下观察姗C、MFC／pcDNA3．1和MFC／IL．17细胞无明显形态学变化；RT-PCR实验结果

7、显示，MFC／IL．17细胞能表达m．17基因，而MFC和MFC／pcDNA3．1细胞无IL．17基因表达。ELISA实验结果显示，与MFC和MFC／pcDNA3．1细胞相比，MFC／IL．17细胞分泌IL．17能力明显增强(氏O．05)。2MTT实验结果显示，MFC、MFC／pcDNA3．1和MFC／IL．t7细胞的体外增殖活性无明显差异(P>O．05)。流式细胞分析结果显示，三组细胞凋亡率无显著差异(胗0．05)。上述结果提示，转染IL．17基因对MFC细胞的体外增殖和凋亡无显著影响。3RT-PCR实验结果显示，与MFC和MFC／pcDNA3．1细胞相比，M

8、FC／IL一17细胞内趋