姜黄素抑制子宫内膜异位症雌激素生成的实验研究

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1、姜黄素抑制子宫内膜异位症雌激素生成的实验研究作者：余峥，王文娟，张昌军，彭海英【摘要】目的观察姜黄素对子宫内膜异位症（EMs）内膜细胞雌激素生成水平的影响。方法首先建立子宫内膜异位症体外模型，分离培养EMs腺上皮细胞和间质细胞，随后将分离培养的细胞与混合培养细胞的雌激素分泌水平进行比较，明确EMs内膜高水平雌激素的组织来源，再次混合培养EMs的异位内膜细胞，加入终浓度为50μg/ml的姜黄素，进行药物干预。分为非EMs内膜细胞组、EMs内膜细胞组、姜黄素组及来曲唑组，电化学发光免疫法检测培养液上清中

2、雌二醇（E2）水平。结果电化学发光免疫法表明，EMs内膜细胞组雌二醇分泌水平最高，为(16.82±1.04)pg/ml，明显高于其余各组，组间比较差异有极显著性。EMs内膜细胞分泌雌二醇的水平随着时间的延长而增加。姜黄素50μg/ml组和0.1μg/ml来曲唑组较未给药的EMs内膜细胞组分泌雌二醇的水平明显降低。结论EMs内膜细胞分泌雌激素呈高表达，并且间质细胞和腺上皮细胞均有较强的分泌能力，与非EMs内膜细胞相比，差异显著。姜黄素可抑制EMs体外雌激素分泌的能力，并呈时间依赖性。【关键词】子宫内膜

3、异位症；姜黄素；雌激素13　子宫内膜异位症（endometriosis，EMs）是生育期妇女常见的良性疾病，不孕率呈逐年上升趋势，其发病机制尚未阐明。在经血逆流“种植学”的基础上，研究学者提出的“在位内膜学说”表明，EMs的在位和异位内膜相似的具有与正常子宫内膜迥异的遗传和内在生物学特性。因此可以推测，EMs在位内膜是病变的源头，而直接干预在位内膜可达到防治EMs的效果。EMs是雌激素依赖性疾病，雌激素的合成和代谢与EMs的发生发展密切相关。抑制EMs病灶局部雌激素生成成为目前研究关注的热点。　　姜

4、黄素（Curcumin）是从姜黄、郁金的块茎中提取的一种植物多酚，具有抗炎、抗肿瘤、诱导凋亡等作用。近年研究表明它在体内外均可诱导EMs内膜细胞凋亡。本实验以EMs异位细胞体外模型作为实验对象，以“雌激素依赖性疾病”为切入点，观察姜黄素对其雌激素生成是否具有抑制作用，探讨姜黄素源头治疗EMs的作用靶点和机制，为EMs的治疗开辟新的途径。　　1材料　　1.1试剂的配制　　1.1.1DMEM液称量DMEM粉剂6.75g放入烧杯中，用少量的三蒸水混匀，再用三蒸水定容至40013ml，用增压滤器高压除菌，装

5、入消毒瓶中备用，4℃保存，用前加入10%含量的胎牛血清。　　1.1.24%台盼蓝母液称取4g台盼蓝置于研钵中，加入少量的三蒸水反复研磨，再加入三蒸水至100ml，以1500r/min离心15min，收取上清液即为4%水溶液，使用时用PBS稀释至0.4%。　　1.1.30.1%胰酶称量PBS粉剂0.955g，胰酶0.1g，EDTA0.01g，将其放入100ml三蒸水中混匀，用增压滤器高压灭菌，放入消毒瓶中备用。　　1.1.40.02%EDTA称取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中，加

6、入约800ml的去离子水，充分搅拌，用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH)，加去离子水将溶液定容至1L，适量分成小份后，高温高压灭菌，室温保存。　　1.1.50.1mol/LPBSNaCl8g,Na2HPO4·12H2O2.89g,KH2PO40.2g,KCl0.2g充分溶解于900ml的3蒸水中，调pH值为7.2～……7.4，定容至1000ml，放置4℃的冰箱中备用。　　1.2病例的选择及子宫内膜标本的采集　　1.2.113EMs的病例入选标准2008-06～2009-06在湖北郧阳市人

7、民医院妇产科因子宫内膜异位症就诊的患者9例，年龄24～45岁，月经规律，周期28～32d，无其他内分泌、免疫或代谢性疾病，手术前三个月内未接受激素治疗，腹腔镜下切除巧克力囊肿，用无菌手术刀切下标本部分，装入已经准备好无血清加入双抗的DMEM液的无菌管内，立即送回实验室。　　1.2.2对照组病例入选标本标准2008-06～2009-06在本生殖中心因不孕来行IVF-ET的患者，行宫腔镜时留取子宫内膜。装入已经准备好的无血清加入双抗的DMEM液无菌管内，立即送回实验室。　　1.3受试药物与剂量姜黄素，购

8、自于Fluka公司，分子式C12H20O6，分子量为368.4，纯度为99%。本课题组前期的研究表明，姜黄素的剂量为50μg/ml时能发挥最佳的药理性能，故本实验将采用此剂量来观察对EMs的雌激素分泌的影响。以0.1mg/kg来曲唑作为西药对照组。　　2方法　　2.1　细胞原代培养　　在实验室的超净台中，用PBS洗涤标本4次，剔除血块，并在第4次洗涤时加入双抗20μ13l，用无菌镊子将标本放置于无菌组织瓶中，用组织剪将标本剪碎至＜1mm3（肉眼呈模糊状），目测标本体积